FISH-test: vähi kiire diagnoosimine. Fluorestsents in situ hübridisatsioon Kalade uurimismeetod
Hübridisatsiooni meetod kohapeal* (in situ, lat.) põhineb DNA või RNA võimel moodustada DNA/RNA sondidega stabiilseid hübriidmolekule otse fikseeritud kromosoomide ja interfaasiliste tuumade preparaatidel. Seda meetodit kasutades on võimalik määrata peaaegu iga DNA või RNA järjestuse täpne asukoht otse rakus, raku tuum või kromosoomides.
Hübridisatsiooni läbiviimiseks kohapeal Sobivad mis tahes koe või elundi rakkude tsütoloogilised või histoloogilised preparaadid, mis on valmistatud standardmeetodite kohaselt. Kliinilises tsütogeneetilises laboris kasutatakse kultiveeritud perifeerse vere lümfotsüütide preparaate, koorioni epiteeli tsütotrofoblastirakke, kultiveeritud ja kultiveerimata lootevee rakke, erinevaid kudesid abordimaterjalist, samuti põseepiteelirakkude ja vere määrdeid.
Hübridisatsiooni meetod kohapeal on praktilise tsütogeneetika jaoks eriti oluline tänu mitteisotoopse variandi väljatöötamisele, mis põhineb mitteradioaktiivsete modifitseeritud nukleotiididega märgistatud sondide kasutamisel. Mitteisotoopsetel hübridiseerimisvõimalustel preparaatidel (eriti fluorestseeruvatel) on isotoopidega võrreldes mitmeid eeliseid: suurem lahutusvõime, mis võrdub mikroskoobi eraldusvõimega (0,1 - 0,2 mikronit), tulemuste statistilise töötlemise vajadus, kiirus ja ohutus tervishoiuteadlastele
Lisaks tuvastati erinevate modifitseeritud proovide kombinatsioon kasutades erinevad süsteemid tuvastamine, võimaldab üheaegselt määrata kahe või enama DNA järjestuse asukohta ühes rakus või ühel metafaasiplaadil. Ja fluorokroomidega märgistatud korduvate järjestuste kasutamine DNA-sondidena vähendab protseduuri aega 7–9 tunnini (hübridisatsiooni klassikaline mitteisotoopne versioon võtab aega kaks päeva, isotoopvariandid nädalast kuuni), mis on eriti oluline sünnieelses eas. diagnoos. Kasutamine KALA meetod tsütogeneetilises diagnostikas võimaldab see tuvastada kromosoomide struktuurseid ümberkorraldusi, määrata markerkromosoomide olemust ja analüüsida kromosoomikomplekti arvulisi häireid nii metafaasi kromosoomides kui ka interfaasilistes tuumades.
FISH-meetodi põhimõte
Keskmiselt KALA meetod seisneb hübridisatsioonireaktsioonis kunstlikult loodud DNA sondi ja tuuma DNA komplementaarse nukleotiidjärjestuse vahel. DNA molekul koosneb kahest spiraalselt ühendatud nukleotiidahelast ja hübridiseerumine on võimalik ainult siis, kui ahelad liiguvad lahku. DNA nukleotiidahelate eraldamiseks kasutavad nad denatureerimist (edaspidiseks hübridiseerimiseks tuleb denatureerida nii uuritava proovi tuumades olev DNA kui ka DNA sond ise). Pärast denatureerimist hübridiseerub DNA sond oma komplementaarse nukleotiidjärjestusega ja seda saab tuvastada fluorestsentsmikroskoobiga.
Seega üldine vorm seadistamise protokoll KALA võib esitada järgmisel kujul:
1. Histoloogilise või tsütoloogilise proovi valmistamine.
Ettevalmistus histoloogiline proov järgi läbi viidud standardskeem: lõikamine, märgistamine, juhtmestik, kinnistamine, mikrotoomia, sektsiooni asetamine slaidile ja vaha eemaldamine. Tsütoloogilise preparaadi valmistamisel kasutatakse spetsiaalseid sadestamislahuseid ja tsentrifuugimist, mis võimaldab saada kontsentreeritud rakususpensiooni.
2. Eeltöötlus (vajadusel).
Ravimit töödeldakse proteaasidega, et kõrvaldada hübridisatsiooni takistavate valkude olemasolu.
3. DNA sondi kasutamine preparaadile ja sellele järgnev denatureerimine.
Sondi ja proovi DNA denatureerimiseks töödeldakse neid formamiidiga ja kuumutatakse temperatuurini umbes 85–90 °C.
4. Hübridiseerimine.
Pärast denatureerimist jahutatakse ravim teatud temperatuurini (37 °C, kui Kliinilistes uuringutes) ja inkubeeritakse mitu tundi niiskes kambris (inkubatsiooni kestus on täpsustatud igas konkreetses protokollis). Praegu kasutatakse denatureerimiseks ja hübridiseerimiseks automaatseid hübridisaatoreid.
5. Pesemine.
Pärast hübridisatsiooni lõppu on vaja sidumata sondid maha pesta, mis muidu tekitaks tausta, mis raskendaks FISH-analüüsi tulemuste hindamist. Tavaliselt kasutatakse loputamiseks naatriumtsitraati ja -kloriidi (SSC) sisaldavat lahust.
6. Vastuvärvimine.
Kasutades fluorestseeruvaid värvaineid (DAPI – 4,6-diamidiin-2-fenüülindool; propiidiumjodiid), värvitakse kogu tuuma DNA.
7. Tulemuste analüüs fluorestsentsmikroskoobi abil. Rutiinseid toiminguid (vahaeemaldus, eeltöötlus, pesemine) saab automatiseerida.
* - Materjal on koostatud avatud allikatest pärineva teabe põhjal.
Pakub Assuta Clinic. Fluorestsentshübridisatsioon ehk FISH on geneetiline test, mis annab ülevaate kasvaja olemusest. Uurides kasvajat FIS-i abil, saab arst teada, kas vähk on HER2 geeni suhtes positiivne või negatiivne. Keharakkudes esineva geeni koopiad stimuleerivad ebatüüpiliste rakkude kasvu vähirakud. Pärast diagnoosi lõpetamist saab arst koostada täpsema raviplaani.
Assuta kliiniku kaasaegne laborikompleks teeb FISH analüüsi, et hinnata rinnavähi patoloogiaid:
- Unikaalne testimine annab täpse ülevaate kasvaja olemusest ja selle omadustest.
- Erahaiglal on tulemuste saavutamiseks võimsad ressursid.
- Nad töötavad meie heaks parimad arstid Iisrael, diagnostika ja teraapia viiakse läbi vastavalt individuaalsetele skeemidele.
Helistage ja uurige, kuidas ravi taotleda. Taasta oma tervis Lähis-Ida suurimas haiglas.
Registreeruge konsultatsioonile
Rinnavähi kalatest - onkoloogia arengu mehhanism
HER2 geeni retseptorid vastutavad HER2 valkude tootmise eest, mis on vähirakkudes esinevad retseptorid. Kui retseptorid on aktiveeritud, saavad vähirakud signaali jagunemiseks ja paljunemiseks. Tavaliselt reguleerivad HER 2 retseptorid rinnarakkude kasvu, säilitades kudede tervise tasakaalu.
Siiski on tõestatud, et HER 2 geen toodetakse üle igal viiendal vähijuhtumil. See tähendab, et inimesel on ühe geenikoopia asemel geen igalt vanemalt. See seletab HER-i retseptorite liigset suurenemist kehas, põhjustades kontrollimatut ja agressiivset kasvaja kasvu.
Rinnavähi suhtes on vaja läbida kalatesti, et selgitada välja, mil määral on organismis patoloogia väljakujunemise põhjus seotud retseptorite ebanormaalse tootmisega. Peate teadma, kas vähitüüp on HER2 positiivne või negatiivne. On olemas spetsiaalselt HER2-positiivse rinnavähi raviks mõeldud ravi. Analüüs võimaldab teil mitte raisata aega tõhusate mõjutusmeetodite otsimisele.
Kui rinnavähi korral tehakse kalareaktsioon, kasutab arst visualiseerimiseks profiili värvimisaineid kromosomaalsed häired. Uuritavale koele kantud lahus võimaldab näha kõrvalekaldeid. FIS-analüüsi eeliseks on see, et see suudab tuvastada geneetilisi kõrvalekaldeid, mis on alternatiivsete meetoditega mikroskoobi all uurimiseks liiga väikesed.
Testimise eeliseks on ka see, et patsient saab tulemused mõne päeva pärast, teised meetodid annavad tulemuse alles mõne nädala pärast. Lisaks piimanäärme pahaloomulise kasvaja määramisele kasutatakse kalatesti põie vähipatoloogia diagnoosimisel, leukeemia määramisel.
Analüüside tüübid
HER2 positiivse või negatiivse olemuse kindlakstegemiseks suunavad Assuta kliiniku arstid patsiendi enda laborisse uuringutele. Teste on kahte tüüpi:
- Immunohistokeemia – IHC näitab suur hulk orav. Katse ajal uurib patoloog kudesid mikroskoobi all spetsiaalsete värvimisvahendite abil. Tulemuse 1+ või 0 punkti saamiseks ei ole vaja täiendavat testimist. Tulemus 2+ loetakse määramatuks, sel juhul on vaja läbida edasine katsetamine. Tulemus 3+ kinnitab negatiivset stsenaariumi.
- MOG-test (hübridisatsioon) on järgmine samm, kui kahtlustatakse vähki. On oluline, et analüüsi viiks läbi kogenud patoloog, mis välistab saadud tulemuste tõlgendamisel vead. Teste on kahte peamist tüüpi – kalatest rinnavähi tuvastamiseks ja helge välitest. Positiivne kalatest on lõplik diagnostiline meetod.
Väga harva on kalaanalüüs ebamäärane või mitmetähenduslik. Sellistel asjaoludel on diagnoosi kinnitamiseks vajalik uus biopsia ja uus rinnavähi test.
Kuidas tehakse kalatesti rinnavähi puhul - juhend patsiendile
HER 2 staatuse õigeks diagnoosimiseks teeb arst biopsia, mille käigus eemaldatakse patoloogia tõttu muutunud kudede proovid. Enamikul juhtudel kasutatakse seda kohalik anesteesia ebamugavustunde neutraliseerimiseks. Seejärel saadetakse eraldatud kude laborisse, kus sellega töötab patoloog. On väga oluline, et labor oleks meditsiinikeskkonnas autoriteetne, sest õigest diagnoosist sõltub otseselt patsiendi elu. On tõestatud, et kalatest rinnavähi tuvastamiseks ohutu protseduur. See ei nõua palju aega, eraldi protseduure peale biopsia ja täiendava koetrauma.
Miks üldse tehakse IHC testimine? See on lihtsam ja kättesaadavam. Kui testid ei ole siiski lõplikud, on FISH-testi tegemine kohustuslik. Harvadel juhtudel võib olla võimalik korduv biopsia koos proovide võtmisega. Kuid tegelikult juhtub seda äärmiselt harva. Kui rinnavähi kalatest näitab positiivset HER2 tulemust, määratakse teile väljakirjutus tõhus ravi HER2 positiivne vähk. Hoolimata asjaolust, et see on agressiivne patoloogia vorm, on selle diagnoosiga inimeste väljavaated viimased aastad on oluliselt paranenud. Selle põhjuseks on uued ja tõhusad meetodid rinnavähi ravi Iisraelis, mis on suunatud HER 2 retseptoritele.
Taotlege ravi
HER-2 kasvaja staatuse määramine FISH abil- kasvaja arengu eelsoodumuse uurimine ja õigeaegse adekvaatse rinnavähi (BC) või maovähi (GC) ravi valik.
HER-2 (HER-2/neu)- inimese epidermaalse kasvufaktori retseptor-2 on valk, mis võib mõjutada vähirakkude kasvu. Selle loob spetsiaalne geen, mida nimetatakse HER-2/neu geeniks. HER-2 on teatud kasvufaktori, mida nimetatakse inimese epidermise kasvufaktoriks, retseptor. loomulikult inimestel eksisteeriv. Kui inimese epidermaalne kasvufaktor kinnitub rinnavähirakkude HER-2 retseptoritele, võib see stimuleerida neid rakke kasvama ja jagunema. Terves koes edastab HER-2 signaale, mis reguleerivad rakkude proliferatsiooni ja ellujäämist, kuid HER-2 üleekspressioon võib põhjustada rakkude pahaloomulist transformatsiooni.
HER-2 üleekspressioon mõnedes rinnavähi alatüüpides põhjustab suurenenud proliferatsiooni ja angiogeneesi, apoptoosi düsregulatsiooni (geneetiliselt programmeeritud raku enesehävitamine). On näidatud, et rinnavähi korral on selle retseptori üleekspressioon kasvajakoes seotud haiguse agressiivsema kulgemise, kasvaja suurenenud metastaatilise potentsiaaliga ja ebasoodsama prognoosiga. HER-2 üleekspressiooni ja rinnavähi ebasoodsa prognoosi vahelise seose avastamine on viinud ravimeetodite otsimiseni, mis on suunatud HER-2/neu onkogeeni spetsiifilisele blokeerimisele (sihipärane HER2-vastane ravi).
Rinnavähk (BC) - pahaloomuline kasvaja piimanäärme näärmekude. Rinnavähk on naiste pahaloomuliste haiguste seas esikohal.
Sõltuvalt kasvaja bioloogiliste markerite olemasolust - hormonaalsete retseptorite (östrogeen ja/või progesteroon) ekspressioon, eristatakse HER-2 - hormoonretseptor-positiivset, HER-2-positiivset ja kolmiknegatiivset rinnavähki.
HER-2/neu-positiivseid (HER-2+) rinnavähi tüüpe iseloomustab HER-2/neu valgu kõrge ekspressioon.
HER=2/neu-negatiivseid (HER-2-) rinnavähi tüüpe iseloomustab HER-2/neu valgu madal ekspressioon või puudumine.
Arvatakse, et igal viiendal rinnavähiga naisel on HER-2 positiivne kasvaja. Enamik rinnavähki on hormoonsõltuvad: östrogeenidel ja progesteroonil on neile stimuleeriv (proliferatiivne ja neoplastiline) toime. HER-2-positiivse rinnavähi korral on kasvajarakkude pinnal HER-2 retseptorite liig. Seda nähtust nimetatakse "positiivseks HER-2 staatuseks" ja seda diagnoositakse 15–20% rinnavähi all kannatavatest naistest.
HER-2- inimese epidermaalse kasvufaktori tüüp 2 retseptor, mis esineb kudedes normaalselt, osaledes rakkude jagunemise ja diferentseerumise reguleerimises. Selle liig kasvajarakkude pinnal (üleekspressioon) määrab kasvaja kiire kontrollimatu kasvu, suure metastaaside riski ja teatud tüüpi ravi madala efektiivsuse. HER-2 positiivne rinnavähk on eriti agressiivne vorm sellest haigusest, Sellepärast täpne määratlus HER-2 staatus on ravitaktika valikul võtmetähtsusega.
Maovähk (GC)- pahaloomuline kasvaja, mis pärineb mao limaskesta epiteelist.
GC on vähihaigestumise struktuuris 4. kohal ja vähisuremuse struktuuris 2. kohal maailmas. Meeste maovähi esinemissagedus on 2 korda kõrgem kui naistel. Venemaa kuulub piirkondadesse kõrge tase GC esinemissagedus ja suremus sellest haigusest. Maovähi diagnoos peal varajased staadiumid raske haiguse pika asümptomaatilise kulgemise tõttu. GC avastatakse sageli hilises staadiumis, kui 5-aastane elulemus ei ületa 5–10% ja keemiaravi jääb ainsaks ravimeetodiks.
Maovähi peamine ravimeetod on operatsioon. Kuid enamikul patsientidest määratakse diagnoosimise ajal laialt levinud kasvajaprotsess, mis muudab selle võimatuks. radikaalne kirurgia ja nõuab süstemaatilist ravimteraapia. Keemiaravi suurendab statistiliselt oluliselt metastaatilise vähiga patsientide üldist elulemust, parandades nende elukvaliteeti.
HER-2 (erbB-2) onkogeen tuvastati algselt rinnakasvajate puhul. Selle geeni amplifikatsioon ja üleekspressioon on rinnakartsinoomide puhul suhteliselt spetsiifiline sündmus ja seda praktiliselt ei esine teistes kasvajates. Maovähk näib olevat üks väheseid erandeid, HER-2 aktivatsiooni täheldati ligikaudu 10–15% juhtudest. pahaloomulised kasvajad selle organi suhtes ja on korrelatsioonis haiguse agressiivse kuluga.
HER-2 üleekspressioon on halva prognoosi tegur. Erinevate uuringute kohaselt korreleerub HER-2 geeni amplifikatsioon vähihaigetel madala üldise elulemusega.
HER-2 staatuse hindamiseks vähi ja rinnavähi korral kasutatakse FISH-meetodit.
KALA- uuringud võimaldavad määrata kromosoomide kvalitatiivseid ja kvantitatiivseid muutusi pahaloomuliste verehaiguste ja soliidkasvajate diagnoosimiseks.
Tänapäeval kasutatakse FISH-uuringuid laialdaselt kogu maailmas.
FISH-meetod (fluorestseeruv in situ hübridisatsioon) on uuring HER-2/neu geenide arvu kohta vähirakkudes.
Näidustused:
- rinnavähk - prognoosimise ja ravi valiku eesmärgil;
- maovähk - prognoosimise ja ravi valiku eesmärgil.
Määrab raviarst.
Vaja on histoloogilist protokolli ja immunohistokeemilist protokolli, IHC klaasi.
Tulemuste tõlgendamine
FISH-testi tulemused on väljendatud järgmiselt:
1. Positiivne ( suurenenud sisu, toimub HER-2 geeni amplifikatsioon):
- HER-2 positiivne rinnavähk;
- HER-2 negatiivne rinnavähk.
rinnavähk - ohtlik haigus, mis statistika järgi on naiste vähihaiguste seas esikohal. Selle haiguse tekkerisk suureneb kõigil üle 40-aastastel naistel ja see võib olla tingitud mitmetest muudest teguritest. Kõige rohkemate hulgas tõenäolised põhjused rinnavähi esinemise hulka kuuluvad rasvumine, geneetiline või pärilik eelsoodumus, varajane algus menstruatsioon ja selle hiline lõppemine, hormonaal- või kiiritusravi.
Lisaks suureneb haigestumuse risk sünnitamata naistel ja naistel, kes on juba põdenud vähki. Ka mehed võivad haigestuda rinnavähki.
Diagnoosimise tüübid ja meetodid
Rinnavähi diagnoosimise esimene etapp on mammoloogi rutiinne läbivaatus. Üle 40-aastased naised peaksid läbima sellised uuringud vähemalt kord kahe aasta jooksul. Arst teeb piimanäärmete visuaalset uurimist, palpatsiooni ja mammograafiat. Haiguse arengu visuaalsed märgid võivad hõlmata järgmist:
Üldine informatsioon
Rindade röntgenuuring (mammograafia) võimaldab teil määrata kasvaja olemasolu, suurust ja asukohta. Saadud tulemuste täpsuse suurendamiseks kasutatakse süstimistehnoloogiat kontrastaine. Kui kasvaja on juba avastatud, siis kasutatakse pneumotsüstograafia meetodit - kasvajavedeliku eemaldamist ja õhu sisestamist õõnsusse. Kui kasvaja olemasolu ei ole täpsustatud, kasutatakse duktograafiat - kontrastaine sisestamist piimakanalitesse.
Need meetodid võimaldavad visualiseerida moodustiste olemasolu rinnakoes.
Kui kasvaja esinemine ilmneb ka mammograafias, antakse patsiendile saatekiri diagnostiliste meetmete kogumiseks:
![](https://i0.wp.com/dlyagrudi.ru/wp-content/uploads/2016/09/Bcrablmet.jpg)
Ultraheli abil saab arst eristada kasvajat tsüstist ja selgitada moodustumise asukohta. Pärast seda võetakse sellest koeproov biopsia jaoks. Biopsia võimaldab teil välja selgitada kasvaja tüübi: healoomuline või pahaloomuline, samuti määrata, kas kasvaja on hormoonsõltuv. See teave võimaldab arstil otsustada ravistrateegia üle, kuid see ei võimalda alati määrata staadiumi. Sageli isegi kõigi vajalike diagnostiliste meetmetega saab seda määrata alles pärast operatsiooni.
Histoloogiliste uuringute mehhanism
Kudede biopsia tehakse nii enne kui ka pärast operatsiooni. Protseduur viiakse läbi pärast moodustumise lokaliseerimise selgitamist.
Biopsia on koetüki eemaldamise protsess ja selle uuringut nimetatakse " histoloogiline uuring"või lihtsalt "histoloogia".
Meditsiinitöötaja eemaldab kasvajast väikese koguse kudet spetsiaalse nõelaga või saadetakse patsiendi kehast juba eemaldatud kasvaja histoloogilisele uuringule. Seejärel värvitakse ja töödeldakse koefragment spetsiaalselt kontrastsuse suurendamiseks ja uurimise hõlbustamiseks. Spetsialist uurib lõiku mikroskoobiga ja annab arvamuse kasvaja moodustumise kvaliteedi kohta. Selles uuringus sõltub palju järelduse teinud laboritehniku tähelepanelikkusest ja kvalifikatsioonist.
Sarnane uuring on immunohistokeemia. Üldiselt võib seda nimetada ka “histoloogiaks”, sest meetod põhineb kudede uurimisel, kuid immunohistokeemia on arenenum analüüsimeetod. Selles uuringus värvitakse kude ka spetsiaalsete reagentidega, mis mitte ainult ei suurenda visuaalset kontrasti, vaid ka kombineerivad ("märgis") antikehadega erilisel viisil, mis võimaldab selgitada. suur kogus neoplasmi omadused. Sel juhul toimub reaktsioon palju kiiremini, mis võimaldab teil kiiresti analüüsitulemusi saada.
Immunohistokeemia võimaldab mitte ainult selgitada kasvaja tüüpi, vaid ka kavandada patsiendi ravistrateegia, mis põhineb kasvajakoe tundlikkuse tuvastamisel. erinevat tüüpi terapeutilised toimed. Lisaks on see uuring võimalikult automatiseeritud, mis võimaldab minimeerida inimfaktorist tingitud diagnostilise vea tõenäosust.
Samuti on olemas kaasaegsed diagnostilised meetmed, mis võimaldavad tuvastada kasvaja olemasolu organismis: see on spektraalne vereanalüüs, immunoloogiline (biokeemiline) analüüs, kasvajakoe FISH-test. Geneetiline vereanalüüs võimaldab igal naisel kontrollida, kas tal on rinnavähi tekkeks eeldusi või mitte. CT ja MRI võimaldavad täpselt määrata kasvaja asukohta ja jälgida selle arengu dünaamikat, hinnates kasvaja struktuuri.
Kuidas tuvastada vähki vereanalüüsi abil?
Vereanalüüsi määrab arst tavaliselt pärast ultraheliuuringut. On olukordi, kus patsient loovutab omal algatusel verd aknamarkerite või geneetiline analüüs et teha kindlaks oma eelsoodumus rinnavähi tekkeks. Mõningatel juhtudel üldine analüüs veri võib olla põhjus onkoloogiakliinikusse pöördumiseks (koos tüki palpeerimisega või visuaalsed märgid vähk).
Biokeemiline analüüs
Veri kui uurimismaterjal võimaldab läbi viia järgmisi diagnostilisi meetmeid:
![](https://i1.wp.com/dlyagrudi.ru/wp-content/uploads/2016/09/1390812102_00036577-300x201.jpg)
Samal ajal võib vähi määramise erimeetoditeks nimetada ainult kahte esimest analüüsi, millest teine on tõenäolisem ennetav meede kui töökorras. Kaks muud vereanalüüsi tehakse peamiselt enne operatsiooni, et teha kindlaks keha seisund ja protsessi ulatus. Kuid nagu juba mainitud, kui rinnus on tunda tükki ja üldine vereanalüüs näitab rohkem kui kahte negatiivset diagnostilist koefitsienti, on see põhjus spetsialistiga konsulteerimiseks. Negatiivsed koefitsiendid on teatud vere koostise parameetrite normivälised näitajad.
Biokeemiline vereanalüüs võimaldab tuvastada kasvajarakkude vastaste antikehade olemasolu. Selliseid kehasid nimetatakse kasvaja markeriteks. Kasvajamarkerite arv ja tüüp sõltuvad vähi kasvaja spetsiifilisusest (asukohast) ja selle arenguastmest. Kasvaja markerite hulka kuuluvad:
![](https://i2.wp.com/dlyagrudi.ru/wp-content/uploads/2016/09/147313117.jpg)
Rinnavähi puhul huvitab raviarst eelkõige kasvajamarkeri CA-15-3 olemasolu, kuna selle olemasolu veres viitab selgelt rinnavähile. Tulemuse dekodeerimine võtab keskmiselt ühe päeva. Biokeemilist analüüsi tehakse haiguse käigus mitu korda. Selleks võetakse veenist verd päeva esimesel poolel tühja kõhuga. Kaks nädalat enne analüüsi lõpetab patsient kogu võtmise ravimid(kinnitab raviarsti). Kaks päeva enne vere loovutamist ei tohi te juua alkoholi, rasvaseid ega praetud toite.
Tund enne protseduuri ei tohiks suitsetada ja emotsionaalset stressi on soovitatav vähendada. Veri peale biokeemiline analüüs Tavaliselt ei võeta neid kohe pärast kiiritus- ja füsioterapeutilist ravi.
Geneetiliste tegurite määramine
Enne geneetilisest vereanalüüsist rääkimist tasub rõhutada erinevust mõistete “geneetiline” ja “pärilik” vahel. Vähi geneetiline tegur on laiem mõiste, mis ei tähenda ainult rinnavähiga sugulaste olemasolu, vaid ka spetsiifilist geenimutatsiooni, mis suurendab selle haiguse riski.
Pärilikkus viitab potentsiaalsele rinnavähi riskile perekonna ajaloo põhjal. Samal ajal võivad mutantse geeni saada mitte ainult naised, vaid ka mehed, kuid selle kandja ei pruugi haigestuda.
Iga naine võib läbida geneetilise testimise. See on eriti soovitatav neile, kelle otsesed sugulased on põdenud rinnavähki. Enne analüüsi jaoks vere loovutamist peaks patsient rääkima geneetika valdkonna spetsialistiga, kes selgitab tulemuste dešifreerimise nüansse. Enne vere loovutamist ei ole patsiendilt vaja erilist ettevalmistust.
Saamise korral positiivne tulemus BRCA geenimutatsioonid, kuid teiste puudumisel murettekitavad sümptomid, pole paanikaks põhjust. Nendes geenides mutatsioonidega naistel võib soovitada ennetava meetmena läbida regulaarne enesekontroll ja füüsiline läbivaatus. 40 aasta pärast on naistele mõttekas mõelda munasarjade ja rindade eemaldamisele noorem vanus kes ei plaani tulevikus lapsi saada, soovitatakse vahel võtta rasestumisvastased vahendid. Otsus nende meetmete üle lasub täielikult naise enda õlul ning nõuab läbimõeldud lähenemist ja arstidega konsulteerimist.
Uusimad diagnostikameetodid
Spektraalanalüüs veri näitab kasvajate esinemist organismis tõenäosusega kuni 93%. See on suhteliselt odav diagnostiline meetod, mis põhineb vereseerumi kiiritamisel infrapunaspektriga ja selle molekulaarse koostise analüüsil.
Spektraalse vereanalüüsi järeldus tehakse vastavalt "olemasolu-puudumise" põhimõttele ja on suunatud enamiku pahaloomuliste kasvajate tüüpide tuvastamisele. See test võib määrata ka rinnavähi arengu staadiumi. Tulemused dešifreeritakse laboris ja ei vaja täiendavat arsti arvamust.
Spektraalseks analüüsiks vere loovutamiseks on vaja lõpetada ravimite võtmine 2 kuud enne protseduuri. Röntgeni- või muu kiiritamise, samuti keemiaravi hetkest peab mööduma vähemalt 3 kuud. Lisaks ei tohi naine verevõtu ajal olla rase ega tal olla menstruatsioon. Vereproovide võtmine toimub tühja kõhuga päeva esimesel poolel. Spektraalne vereanalüüs võtab keskmiselt 12 tööpäeva.
Üks neist uusimad meetodid Vähi diagnoosimine on nn kalatest (FISH, fluorestsentshübridisatsioon). Selle tõhusust arutatakse endiselt, selle teostatavuse põhiküsimus on kallis uurimisprotseduur. Meetodi olemus on raku fragmentide märgistamine fluorestseeruva koostisega ja seejärel mikroskoopiline uurimine rakud. Selle põhjal, milliste geneetilise materjali osadega märgistatud fragmendid on seotud, saab aru, kas patsiendil on eelsoodumus vähi tekkeks ja millised ravimeetodid on konkreetsel juhul asjakohased.
FISH-test ei nõua täielikult küpseid rakke, seega on selle sooritamine palju kiirem kui teiste laboratoorsete testide puhul. Lisaks võimaldab FISH-meetod selgemalt jälgida geneetilisi kahjustusi, mida muud tüüpi analüüsidega pole võimalik teha. FISH-testi kasutatakse kõige sagedamini rinnavähi avastamiseks, kuid see aitab tuvastada ka mitut teist tüüpi onkoloogilised haigused.
FISH-testi puudusteks on lisaks kõrgele hinnale ka selle võimetus töötada mõne kromosoomi piirkonnaga, mis on tingitud märgiste spetsiifilisusest. Lisaks ignoreerib FISH-test teatud tüüpi mutatsioone ja rikkeid geneetiline kood, mis võib olla oluline diagnostiline väljajätmine. FISH-i võrdlevad uuringud odavama IHC-testiga ei näidanud vähirakkude tundlikkuse määramisel Herceptini suhtes olulist eelist. Siiski on FISH-test praegu kiireim vähi diagnoosimise ülitäpsete meetodite seas.
FISH – Fluorescent in situ hübridisatsioonitehnika töötati välja 1980. aastate keskel ja seda kasutatakse spetsiifiliste DNA järjestuste olemasolu või puudumise tuvastamiseks kromosoomides, samuti 6. kromosoomi CEP6 (6p11) tsentromeeril paikneva alfa-satelliidi DNA. 1–11. 1).
See andis tänu kasvajaantigeenide avastamisele olulise nihke melanotsüütilise päritoluga onkoloogiliste haiguste diagnoosimisel. Pahaloomulise tausta taustal määratakse mutatsioon kolmes antigeenis: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) ja CMM1 (1p). Sellega seoses võimalus objektiivne diferentsiaaldiagnostika, mis põhineb melanotsüütiliste nahakasvajate geneetiliste omaduste määramisel, on suur tähtsus V varajane diagnoosimine melanoom ja selle prekursorid. Uuritud geenide normaalse komplekti ja 6. kromosoomiga tuumas vaadeldakse kahte RREB1 geeni, mis on värvitud punaseks, kaks MYB geeni, värvitud kollaseks, kaks CCND1 geeni, esile tõstetud roheline ja kaks kromosoomi 6 tsentromeeri, mis on tähistatud sinine. Diagnostika eesmärgil kasutatakse fluorestsentsteste.
Reaktsioonitulemuste hindamine: iga proovi 30 tuumas loendatakse punaste, kollaste, roheliste ja siniste signaalide hulk, tuvastatakse neli parameetrit erinevaid valikuid geneetilised häired, milles proov on geneetiliselt kooskõlas melanoomiga. Näiteks on proov melanoomiga kooskõlas, kui CCND1 geeni keskmine arv tuuma kohta on ≥2,5. Teiste geenide koopiate arvu hinnatakse samal põhimõttel. Ravim loetakse FISH-positiivseks, kui on täidetud vähemalt üks neljast tingimusest. Proovid, milles kõik neli parameetrit on alla piirväärtusi, loetakse FISH-negatiivseteks.
Konkreetsete DNA järjestuste määramine kromosoomides viiakse läbi biopsiate või kirurgilise materjali lõikudel. Praktilises teostuses näeb FISH reaktsioon välja järgmine: uuritavat materjali, mis sisaldab melanotsüütide tuumades DNA-d, töödeldakse selle molekuli osaliseks hävitamiseks, et lõhkuda kaheahelaline struktuur ja hõlbustada seeläbi juurdepääsu soovitud piirkonda. geen. Proovid klassifitseeritakse selle järgi, kus nad on DNA molekuli külge kinnitatud. Materjal FISH-i reaktsiooni jaoks kliiniline praktika Kasutatakse koe parafiinilõike, määrdeid ja väljatrükke.
FISH-reaktsioon võimaldab tuvastada muutusi, mis on toimunud DNA molekulis geenikoopiate arvu suurenemise, geenikadude, kromosoomide arvu muutuste ja kvalitatiivsed muutused- geeni lookuste liikumine nii samas kromosoomis kui ka kahe kromosoomi vahel.
FISH-reaktsiooni kasutamisel saadud andmete töötlemiseks ja kolme uuringurühma geenide koopiaarvude vaheliste seoste uurimiseks kasutatakse Spearmani korrelatsioonikordajat.
Melanoomi iseloomustab koopiate arvu suurenemine võrreldes nevuse ja düsplastiliste nevustega.
Võrreldes düsplastilise nevusega on lihtsal nevusel koopiate arvus vähem kõrvalekaldeid (st normaalsem koopiate arv).
Otsustusreeglite koostamiseks, mis võimaldavad ennustada, kas valim kuulub ühte või teise klassi (lihtsate ja düsplastiliste nevide diferentsiaaldiagnoos), kasutatakse „otsustuspuude” matemaatilist aparaati. See lähenemisviis on end praktikas hästi tõestanud ja selle meetodi kasutamise tulemusi (erinevalt paljudest teistest meetoditest, näiteks närvivõrkudest) saab selgelt tõlgendada, et koostada otsustusreegleid lihtsate düsplastiliste nevi ja melanoomi eristamiseks. Kõigil juhtudel olid esialgsed andmed nelja geeni koopiate arvud.
Diferentsiaaldiagnostika otsustusreegli koostamise ülesanne on jagatud mitmeks etapiks. Esimeses etapis eristatakse melanoom ja nevus, võtmata arvesse nevuse tüüpi. Järgmises etapis konstrueeritakse otsustusreegel lihtsate ja düsplastiliste nevi eraldamiseks. Lõpuks on viimases etapis võimalik konstrueerida "otsuste puu", et määrata düsplastilise nevuse düsplaasia aste.
Selline nevi alamülesanneteks klassifitseerimise ülesande jaotus võimaldab saavutada igas etapis prognooside suure täpsuse. „Otsustuspuu“ koostamise sisendandmeteks on andmed nelja geeni koopiate arvu kohta melanoomdiagnoosiga patsientidel ja mittemelanoomdiagnoosiga patsientidel (patsiendid, kellel on erinevat tüüpi nevus - lihtne ja düsplastiline). Iga patsiendi kohta on andmed geenikoopiate arvu kohta 30 raku kohta.
Seega võimaldab diagnoosi ennustamise probleemi jagamine mitmeks etapiks koostada ülitäpsed otsustusreeglid mitte ainult melanoomi ja nevusi eristamiseks, vaid ka nevusi tüübi määramiseks ja düsplastilise nevuse düsplaasia astme ennustamiseks. Ehitatud "otsustuspuud" on visuaalsel viisil diagnoosi ennustamine, mis põhineb teabel geenikoopiate arvu kohta ja seda saab hõlpsasti kasutada kliinilises praktikas naha healoomuliste, pahaloomuliste ja pahaloomuliste melanotsüütiliste neoplasmide eristamiseks. Pakutud täiendav meetod diferentsiaaldiagnoos on eriti oluline, kui ekstsisioon hiiglaslik kaasasündinud pigmenteerunud nevi ja düsplastilised nevi patsientidel lapsepõlves, millest alates selliste patsientidega ühendust võetakse raviasutused märkis kõrge protsent diagnostilised vead. Kirjeldatud meetodi kasutamise tulemused on väga tõhusad, seda on soovitatav kasutada pigmenteerunud nahakasvajate diagnoosimisel, eriti FAMM-i sündroomiga patsientidel.