FISH тест: бърза диагностика на рак. Флуоресцентна in situ хибридизация Метод за изследване на риби
Метод на хибридизация на място* (in situ, лат.) се основава на способността на ДНК или РНК да образуват стабилни хибридни молекули с ДНК/РНК проби директно върху препарати от фиксирани хромозоми и интерфазни ядра. С помощта на този метод е възможно да се определи точното местоположение на почти всяка ДНК или РНК последователност директно в клетката, клетъчно ядроили върху хромозомите.
Да се извърши хибридизация на мястоПодходящи са цитологични или хистологични препарати от клетки от всяка тъкан или орган, приготвени по стандартни методи. В клинична цитогенетична лаборатория се използват препарати от култивирани лимфоцити от периферна кръв, хорионепителни цитотрофобластни клетки, култивирани и некултивирани клетки от амниотична течност, различни тъкани от абортен материал, както и натривки от букални епителни клетки и кръв.
Метод на хибридизация на място е от особено значение за практическата цитогенетика, благодарение на разработването на неизотопен вариант, базиран на използването на проби, маркирани с нерадиоактивни модифицирани нуклеотиди. Неизотопните варианти за хибридизация върху препарати (особено флуоресцентни) имат редица предимства в сравнение с изотопните: по-голяма разделителна способност, която е равна на разделителната способност на микроскоп (0,1 - 0,2 микрона), няма нужда от статистическа обработка на резултатите, скорост и безопасност за здравните изследователи
В допълнение, комбинацията от различно модифицирани проби, открити с помощта на различни системиоткриване, ви позволява едновременно да определите местоположението на две или повече ДНК последователности в една клетка или на една метафазна плоча. А използването на повтарящи се последователности, маркирани с флуорохроми като ДНК проби, намалява времето на процедурата до 7 - 9 часа (класическата неизотопна версия на хибридизацията отнема два дни, изотопните варианти от седмица до месец), което е особено важно за пренаталното диагноза. Използване FISH методв цитогенетичната диагностика позволява да се идентифицират структурни хромозомни пренареждания, да се установи естеството на маркерните хромозоми и да се анализират числените нарушения на хромозомния набор, както върху метафазните хромозоми, така и в интерфазните ядра.
Принцип на метода FISH
В основата FISH методлежи реакцията на хибридизация между изкуствено създадена ДНК сонда и комплементарна нуклеотидна последователност на ядрена ДНК. Молекулата на ДНК се състои от две спирално свързани нуклеотидни вериги и хибридизацията е възможна само ако веригите се раздалечат. За да се разделят нуклеотидните вериги на ДНК, те прибягват до денатурация (за последваща хибридизация, както ДНК в ядрата на тестовата проба, така и самата ДНК сонда трябва да бъдат денатурирани). След денатуриране, ДНК сондата се хибридизира към своята комплементарна нуклеотидна последователност и може да бъде открита с помощта на флуоресцентен микроскоп.
По този начин, обща формапротокол за настройка РИБАможе да се представи в следната форма:
1. Приготвяне на хистологичен или цитологичен препарат.
Подготовка хистологичен препаратизвършено съгласно стандартна схема: изрязване, маркиране, окабеляване, вграждане, микротомия, поставяне на среза върху предметно стъкло и депарафинизация. При приготвянето на цитологичен препарат се използват специални утаителни разтвори и центрофугиране, което позволява да се получи концентрирана клетъчна суспензия.
2. Предварителна обработка (при необходимост).
Лекарството се третира с протеази, за да се елиминира наличието на протеини, които възпрепятстват хибридизацията.
3. Прилагане на ДНК сонда към препарата и последваща денатурация.
За да се денатурират сондата и пробата ДНК, те се третират с формамид и се нагряват до температура около 85-90°C.
4. Хибридизация.
След денатуриране лекарството се охлажда до определена температура (37°C в случай на клинични изпитвания) и се инкубират във влажна камера за няколко часа (продължителността на инкубацията е посочена във всеки конкретен протокол). Понастоящем се използват автоматични хибридизатори за денатурация и хибридизация.
5. Измиване.
След завършване на хибридизацията е необходимо да се отмият несвързаните проби, които иначе биха създали фон, който би затруднил оценката на резултатите от FISH анализа. Обикновено за изплакване се използва разтвор, съдържащ натриев цитрат и хлорид (SSC).
6. Контраоцветяване.
Използвайки флуоресцентни багрила (DAPI - 4,6-диамидин-2-фенилиндол; пропидиев йодид), цялата ядрена ДНК се оцветява.
7. Анализ на резултатите с помощта на флуоресцентен микроскоп. Рутинните операции (депарафинизиране, предварителна обработка, измиване) могат да бъдат автоматизирани.
* - Материалът е изготвен въз основа на информация от открити източници.
Предлага се от клиника Assuta. Флуоресцентната хибридизация, известна още като FISH, е генетичен тест, който дава представа за природата на тумора. Чрез изследване на тумор с помощта на FIS, лекарят ще разбере дали ракът е положителен или отрицателен за HER2 гена. Копия на гена, присъстващи в клетките на тялото, стимулират растежа на атипичните ракови клетки. След завършване на диагнозата лекарят ще може да изготви по-подробен план за лечение.
Модерният лабораторен комплекс на клиниката Assuta провежда FISH анализ за оценка на патологиите на рака на гърдата:
- Уникалното изследване дава точна представа за естеството на тумора и неговите характеристики.
- Една частна болница има мощни ресурси за постигане на резултати.
- Те работят за нас най-добрите лекариИзраел, диагностиката и терапията се провеждат по индивидуални схеми.
Обадете се, за да разберете как да кандидатствате за лечение. Възстановете здравето си в най-голямата болница в Близкия изток.
Запишете се за консултация
Рибен тест за рак на гърдата - механизмът на развитие на онкологията
HER2 генните рецептори са отговорни за производството на HER2 протеини, които са рецептори, присъстващи в раковите клетки. Когато рецепторите се активират, раковите клетки получават сигнал за делене и размножаване. Обикновено HER 2 рецепторите регулират растежа на клетките на гърдата, поддържайки баланса на здравето в тъканите.
Въпреки това е доказано, че генът HER 2 се произвежда свръхпродукция при всеки пет случая на рак. Това означава, че вместо да има едно копие на гена, човек има ген от всеки родител. Това обяснява излишъка от HER рецептори в тялото, причиняващ неконтролиран и агресивен растеж на тумора.
Необходимо е да се подложи на рибен тест за рак на гърдата, за да се установи до каква степен причината за развитието на патологията в тялото е свързана с ненормалното производство на рецептори. Трябва да знаете дали типът рак е HER2 положителен или отрицателен. Има лечения, специално предназначени за HER 2 позитивен рак на гърдата. Анализът ви позволява да не губите време в търсене на ефективни методи за въздействие.
Когато се извършва реакция на риба за рак на гърдата, лекарят използва субстанции за оцветяване на профила за визуализация хромозомни нарушения. Разтворът, приложен върху изследваната тъкан, позволява да се видят аномалии. Предимството на FIS анализа е, че той може да открие генетични аномалии, които са твърде малки, за да бъдат изследвани под микроскоп с алтернативни методи.
Друго предимство на изследването е, че пациентът получава резултатите след няколко дни, докато други методи дават резултат едва след няколко седмици. В допълнение към определянето на злокачествен тумор на млечната жлеза, тестът за риба се използва при диагностицирането на раковата патология на пикочния мехур, при определянето на левкемия.
Видове анализи
За да определят положителния или отрицателния характер на HER2, лекарите от клиниката Assuta насочват пациента за изследване в собствената си лаборатория. Има два вида тестове:
- Имунохистохимия – IHC разкрива голям бройкатерица. По време на теста патолог изследва тъкан под микроскоп, като използва специални оцветители. Не се изисква допълнително тестване за резултат 1+ или резултат 0. Резултат 2+ се счита за неопределен, в който случай е необходимо преминаване по-нататъшно тестване. Резултат 3+ потвърждава негативния сценарий.
- MOG тестът (хибридизация) е следващата стъпка, ако се подозира рак. Важно е анализът да се извърши от опитен патолог, което ще елиминира грешките при тълкуването на получените резултати. Има два основни типа тестове - тестване с риба за рак на гърдата и тестване със светло поле. Положителният рибен тест е окончателният диагностичен метод.
Много рядко анализът на рибата е неясен или двусмислен. При такива обстоятелства е необходима още една биопсия и нов рибен тест за рак на гърдата, за да се потвърди диагнозата.
Как се провежда тестът с риба при рак на гърдата - ръководство за пациента
За да диагностицира правилно HER 2 статуса, лекарят извършва биопсия, по време на която се отстраняват проби от тъкани, променени от патологията. В повечето случаи се използва локална анестезияза неутрализиране на дискомфорта. Впоследствие извлечената тъкан се изпраща за изследване в лабораторията, където с нея работи патолог. Много е важно лабораторията да е авторитетна в медицинската среда, защото животът на пациента зависи пряко от правилната диагноза. Доказано е, че рибният тест за рак на гърдата - безопасна процедура. Не изисква много време, отделни процедури освен биопсия и допълнителна тъканна травма.
Защо изобщо се извършва IHC тест? Това е по-просто и по-достъпно. Въпреки това, ако тестовете са неубедителни, тестът FISH е задължителен. В редки случаи може да е възможна повторна биопсия с вземане на проби. Но това всъщност се случва изключително рядко. Ако рибният тест за рак на гърдата покаже положителен HER2 резултат, ще Ви бъде предписано ефективно лечение HER2 позитивен рак. Въпреки факта, че това е агресивна форма на патология, перспективите за хората с тази диагноза са последните годиниса се подобрили значително. Това се дължи на нови и ефективни методилечение на рак на гърдата в Израел, насочено към HER 2 рецепторите.
Кандидатствайте за лечение
Определяне на HER-2 туморен статус чрез FISH- изследване на предразположеността към развитие на тумори и избор на своевременно адекватно лечение на рак на гърдата (РМЖ) или рак на стомаха (РГ).
HER-2 (HER-2/neu)- рецепторът на човешки епидермален растежен фактор-2 е протеин, който може да повлияе на растежа на раковите клетки. Създава се от специален ген, наречен HER-2/neu ген. HER-2 е рецептор за определен растежен фактор, наречен човешки епидермален растежен фактор, естественосъществуващи в хората. Когато човешкият епидермален растежен фактор се прикрепи към HER-2 рецепторите на раковите клетки на гърдата, той може да стимулира тези клетки да растат и да се делят. В здрава тъкан HER-2 предава сигнали, които регулират клетъчната пролиферация и оцеляване, но свръхекспресията на HER-2 може да причини злокачествена трансформация на клетките.
Свръхекспресията на HER-2 при някои подвидове рак на гърдата води до повишена пролиферация и ангиогенеза, дисрегулация на апоптозата (генетично програмирано клетъчно самоунищожение). Доказано е, че при рак на гърдата свръхекспресията на този рецептор в туморната тъкан е свързана с по-агресивен ход на заболяването, повишен метастатичен потенциал на тумора и по-малко благоприятна прогноза. Откриването на връзката между свръхекспресията на HER-2 и неблагоприятната прогноза за рак на гърдата доведе до търсене на подходи за лечение, които са насочени към специфично блокиране на онкогена HER-2/neu (таргетна анти-HER2 терапия).
Рак на гърдата (BC) - злокачествен туморжлезиста тъкан на млечната жлеза. Ракът на гърдата е на първо място сред всички злокачествени заболявания при жените.
В зависимост от наличието на биологични маркери на тумора - експресията на хормонални рецептори (естроген и/или прогестерон), експресията на HER-2 - хормонален рецептор-положителен, HER-2-положителен и тройно негативен рак на гърдата.
HER-2/neu-позитивните (HER-2+) видове рак на гърдата се характеризират с висока експресия на HER-2/neu протеина.
HER=2/neu-отрицателни (HER-2-) видове рак на гърдата се характеризират с ниска експресия или липса на HER-2/neu протеин.
Смята се, че всяка пета жена с рак на гърдата има HER-2 положителен тумор. Повечето видове рак на гърдата са хормонално зависими: естрогените и прогестеронът имат стимулиращ ефект (пролиферативен и неопластичен) върху тях. При HER-2-позитивен рак на гърдата има излишък от HER-2 рецептори на повърхността на туморните клетки. Това явление се нарича „положителен HER-2 статус“ и се диагностицира при 15–20% от жените, страдащи от рак на гърдата.
НЕЯ-2- рецептор за човешкия епидермален растежен фактор тип 2, който присъства нормално в тъканите, участвайки в регулацията на клетъчното делене и диференциация. Неговият излишък върху повърхността на туморните клетки (свръхекспресия) определя бързия неконтролиран растеж на тумора, висок риск от метастази и ниска ефективност на някои видове лечение. HER-2 позитивният рак на гърдата е особено агресивна форма на това заболяване, Ето защо точно определениеСтатусът HER-2 е от ключово значение за избора на тактика на лечение.
Рак на стомаха (GC)- злокачествен тумор, произхождащ от епитела на стомашната лигавица.
GC заема 4-то място в структурата на заболеваемостта от рак и 2-ро място в структурата на смъртността от рак в света. Честотата на рак на стомаха при мъжете е 2 пъти по-висока, отколкото при жените. Русия принадлежи към регионите с високо нивоЧестота на GC и смъртност от това заболяване. Диагностика на рак на стомаха на ранни стадиитрудно поради дългия асимптоматичен ход на заболяването. GC често се открива в късните етапи, когато 5-годишната преживяемост не надвишава 5-10%, а химиотерапията остава единственият метод на лечение.
Основният метод за лечение на рак на стомаха е операцията. Въпреки това, при повечето пациенти в момента на диагностициране се определя широко разпространен туморен процес, което прави невъзможно извършването му радикална хирургияи изисква систематичност лекарствена терапия. Химиотерапията статистически значимо увеличава общата преживяемост на пациентите с метастатичен рак, подобрявайки качеството им на живот.
Онкогенът HER-2 (erbB-2) първоначално е идентифициран в тумори на гърдата. Амплификацията и свръхекспресията на този ген е относително специфично събитие за карциноми на гърдата и практически не се среща в тумори с други локализации. Ракът на стомаха изглежда е едно от малкото изключения, като активирането на HER-2 се наблюдава при приблизително 10-15% злокачествени новообразуванияна този орган и корелира с агресивния ход на заболяването.
Свръхекспресията на HER-2 е фактор за лоша прогноза. Според различни проучвания амплификацията на гена HER-2 при пациенти с рак корелира с ниски нива на обща преживяемост.
За оценка на статуса на HER-2 при рак и рак на гърдата се използва методът FISH.
РИБА- изследването ви позволява да определите качествени и количествени промени в хромозомите за диагностика на злокачествени кръвни заболявания и солидни тумори.
Днес изследванията FISH се използват широко в целия свят.
Методът FISH (флуоресцентна in situ хибридизация) е изследване на броя на гените HER-2/neu в раковите клетки.
Показания:
- рак на гърдата - с цел прогноза и избор на терапия;
- рак на стомаха - с цел прогноза и избор на терапия.
Определя се от лекуващия лекар.
Необходими са хистологичен протокол и имунохистохимичен протокол, IHC стъкло.
Тълкуване на резултатите
Резултатите от теста FISH се изразяват, както следва:
1. Положително ( повишено съдържание, има амплификация на гена HER-2):
- HER-2 позитивен рак на гърдата;
- HER-2 негативен рак на гърдата.
Рак на млечната жлеза - опасна болест, което според статистиката е на първо място сред раковите заболявания при жените. Рискът от развитие на това заболяване се увеличава при всички жени над 40-годишна възраст и може да се дължи на няколко други фактора. Сред най вероятни причинипоявата на рак на гърдата включва затлъстяване, генетична или наследствена предразположеност, ранен стартменструация и нейното късно завършване, хормонална или лъчева терапия.
В допълнение, рискът от заболеваемост е повишен при нераждали жени и жени, които вече са имали рак. Мъжете също могат да получат рак на гърдата.
Видове и методи за диагностика
Първият етап от диагностицирането на рак на гърдата е рутинен преглед от мамолог. Жените над 40 години трябва да се подлагат на такива прегледи поне веднъж на две години. Лекарят извършва визуален преглед, палпация и мамография на млечните жлези. Визуалните признаци на развитие на заболяването могат да включват:
Главна информация
Рентгенографията на гърдата (мамография) ви позволява да определите наличието, размера и местоположението на тумора. За повишаване на точността на получените резултати се използва инжекционна технология контрастно вещество. Ако вече е открит тумор, тогава се използва методът на пневмоцистография - отстраняване на туморна течност и въвеждане на въздух в кухината. Ако наличието на тумор не е уточнено, тогава се използва дуктография - въвеждане на контрастно вещество в млечните канали.
Тези методи ви позволяват да визуализирате наличието на образувания в гръдната тъкан.
Ако наличието на тумор стане очевидно и при мамография, пациентът получава направление за набор от диагностични мерки:
![](https://i0.wp.com/dlyagrudi.ru/wp-content/uploads/2016/09/Bcrablmet.jpg)
С помощта на ултразвук лекарят може да различи тумор от киста и да изясни местоположението на образуването. След това от него се взема тъканна проба за биопсия. Биопсията ви позволява да разберете вида на тумора: доброкачествен или злокачествен, както и да определите дали туморът е хормонално зависим. Тази информация позволява на лекаря да вземе решение за стратегия за лечение, но не винаги дава възможност да се определи етапът. Често, дори и при всички необходими диагностични мерки, може да се определи само след операция.
Механизъм на хистологичните изследвания
Преди и след операцията се извършва тъканна биопсия. Процедурата се извършва след изясняване на локализацията на образуванието.
Биопсията е процес на отстраняване на парче тъкан и нейното изследване се нарича „ хистологично изследване"или просто "хистология".
Медицинският работник използва специална игла за отстраняване на малко количество тъкан от тумора или тумор, който вече е бил отстранен от тялото на пациента, се изпраща за хистологично изследване. След това тъканният фрагмент е специално оцветен и обработен, за да се увеличи контрастът и да се улесни изследването. Специалистът изследва среза под микроскоп и дава мнение за качеството на туморната формация. Много в това изследване зависи от вниманието и квалификацията на лабораторния техник, който дава заключението.
Подобно изследване е имунохистохимията. Като цяло може да се нарече и „хистология“, т.к методът се основава на изследване на тъкани, но имунохистохимията е по-напреднал метод за анализ. В това изследване тъканта също се оцветява със специални реагенти, които не само подобряват визуалния контраст, но и се комбинират („маркират“) с антитела по специален начин, което прави възможно изясняването голямо количествохарактеристики на неоплазмата. В този случай реакцията протича много по-бързо, което ви позволява бързо да получите резултатите от анализа.
Имунохистохимията позволява не само да се изясни вида на тумора, но и да се планира стратегия за лечение на пациента въз основа на идентифициране на чувствителността на туморната тъкан към различни видоветерапевтични ефекти. В допълнение, това изследване е възможно най-автоматизирано, което ни позволява да сведем до минимум вероятността от диагностична грешка поради човешкия фактор.
Има и съвременни диагностични мерки, които позволяват да се открие наличието на тумор в тялото: това е спектрален кръвен тест, имунологичен (биохимичен) анализ, FISH тест на туморна тъкан. Генетичният кръвен тест позволява на всяка жена да провери дали има или няма предпоставки за рак на гърдата. CT и MRI позволяват точно да се определи местоположението на тумора и да се наблюдава динамиката на неговото развитие, като се оценява структурата на тумора.
Как да открием рак чрез кръвен тест?
Обикновено кръвен тест се предписва от лекар след ултразвуково изследване. Има ситуации, когато пациент по собствена инициатива дарява кръв за маркери на прозорци или генетичен анализза да определите предразположението си към рак на гърдата. В някои случаи общ анализкръв може да бъде причина да се свържете с онкологична клиника (заедно с палпиране на бучка или визуални знацирак).
Биохимичен анализ
Кръвта като материал за изследване позволява извършването на следните диагностични мерки:
![](https://i1.wp.com/dlyagrudi.ru/wp-content/uploads/2016/09/1390812102_00036577-300x201.jpg)
В същото време само първите два анализа могат да се нарекат специализирани методи за определяне на рак, вторият от които е по-вероятен превантивна мяркаотколкото оперативно. Други два кръвни теста се правят предимно преди операцията, за да се установи състоянието на организма и степента на процеса. Въпреки това, както вече беше споменато, ако се усети бучка в гърдите и общият кръвен тест показва повече от два отрицателни диагностични коефициента, това е причина да се консултирате със специалист. Отрицателните коефициенти са показатели извън нормата в определени параметри на кръвния състав.
Биохимичен кръвен тест може да открие наличието на антитела срещу туморни клетки. Такива тела се наричат туморни маркери. Броят и видът на туморните маркери зависят от спецификата (локацията) на раковия тумор и етапа на неговото развитие. Туморните маркери включват:
![](https://i2.wp.com/dlyagrudi.ru/wp-content/uploads/2016/09/147313117.jpg)
В случай на рак на гърдата, лекуващият лекар ще се интересува предимно от наличието на туморен маркер CA-15-3, тъй като присъствието му в кръвта ясно показва рак на гърдата. Декодирането на резултата отнема средно един ден. Биохимичен анализ се извършва няколко пъти в хода на заболяването. Кръвта за това се взема от вената през първата половина на деня на празен стомах. Две седмици преди изследването пациентът спира приема на всички лекарства(потвърждава се от лекуващия лекар). Два дни преди кръводаряване не трябва да пиете алкохол, мазни и пържени храни.
Един час преди процедурата не трябва да се пуши и е препоръчително да се намали емоционалният стрес. Кръв върху биохимичен анализОбикновено те не се приемат веднага след лъче- и физиотерапевтично лечение.
Определяне на генетични фактори
Преди да говорим за генетично кръвно изследване, си струва да подчертаем разликата между понятията „генетичен“ и „наследствен“. Генетичният фактор на рака е по-широко понятие, което предполага не само наличието на роднини с рак на гърдата, но и специфична генна мутация, която увеличава риска от това заболяване.
Наследствеността предполага потенциален риск от рак на гърдата въз основа на фамилната история. В същото време не само жените, но и мъжете могат да получат мутантния ген, но неговият носител не е задължително да се разболее.
Всяка жена може да се подложи на генетично изследване. Това се препоръчва особено за тези, чиито преки роднини са имали рак на гърдата. Преди да дари кръв за анализ, пациентът трябва да говори със специалист в областта на генетиката, който ще обясни нюансите на дешифрирането на резултатите. Не се изисква специална подготовка от пациента преди кръводаряване.
В случай на получаване положителен резултат BRCA генни мутации, но при липса на други тревожни симптоми, няма място за паника. Жените с мутации в тези гени може да бъдат посъветвани да се подлагат на редовен самоизследване и физически прегледи като превантивни мерки. След 40 години има смисъл да се мисли за премахване на яйчниците и гърдите, за жените по-млада възрасткоито не планират да имат деца в бъдеще, понякога се препоръчва да приемат контрацепция. Решението за тези мерки е изцяло на плещите на самата жена и изисква обмислен подход и консултация с лекари.
Най-новите диагностични методи
Спектрален анализкръвта разкрива наличието на тумори в тялото с вероятност до 93%. Това е сравнително евтин диагностичен метод, който се основава на облъчване на кръвен серум с инфрачервен спектър и анализ на неговия молекулен състав.
Заключението за спектрален кръвен тест се дава на принципа "наличие-отсъствие" и е насочено към идентифициране на повечето видове злокачествени тумори. Този тест може също така да определи етапа на развитие на рака на гърдата. Резултатите се дешифрират в лабораторията и не изискват допълнително лекарско мнение.
За да дарите кръв за спектрален анализ, е необходимо да спрете приема на лекарства 2 месеца преди процедурата. От момента на рентгеново или друго облъчване, както и химиотерапия трябва да минат най-малко 3 месеца. Освен това жената не трябва да е бременна или да има менструация по време на вземането на кръв. Вземането на кръв се извършва на празен стомах през първата половина на деня. Един спектрален кръвен тест отнема средно 12 работни дни.
Един от най-новите методиДиагнозата на рака е така нареченият „фиш тест” (FISH, флуоресцентна хибридизация). Ефективността му все още се обсъжда; основният въпрос за неговата осъществимост е скъпата изследователска процедура. Същността на метода е да се маркират клетъчни фрагменти с флуоресцентен състав и след това микроскопско изследванеклетки. Въз основа на това с кои части от генетичния материал са свързани белязаните фрагменти, може да се разбере дали пациентът има предразположеност към рак и какви методи на лечение ще бъдат подходящи в конкретен случай.
Тестът FISH не изисква напълно зрели клетки, така че е много по-бърз за изпълнение от други лабораторни тестове. В допълнение, методът FISH ви позволява по-ясно да наблюдавате генетичните увреждания, което е невъзможно да се направи с други видове анализи. Тестът FISH най-често се използва за откриване на рак на гърдата, но работи и за откриване на няколко други вида онкологични заболявания.
Недостатъците на теста FISH включват, в допълнение към високата му цена, неговата неспособност да работи върху някои хромозомни региони поради спецификата на таговете. В допълнение, тестът FISH игнорира някои видове мутации и повреди генетичен код, което може да бъде важен диагностичен пропуск. Сравнителните проучвания на FISH с по-евтиния IHC тест не показват значително предимство при определяне на чувствителността на раковите клетки към Herceptin. Въпреки това тестът FISH в момента е най-бързият сред високоточните методи за диагностициране на рак.
Техниката FISH - флуоресцентна in situ хибридизация е разработена в средата на 80-те години на миналия век и се използва за откриване на наличието или отсъствието на специфични ДНК последователности върху хромозомите, както и алфа сателитната ДНК, разположена върху центромера на хромозома 6, CEP6(6p11. 1-q11. 1).
Това даде значителна промяна в диагностиката на онкологичните заболявания с меланоцитен произход поради откриването на туморни антигени. На злокачествен фон се определя мутация в три антигена: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) и CMM1(1p). В тази връзка възможността за обектив диференциална диагноза, въз основа на определяне на генетичните характеристики на меланоцитните кожни тумори, има голямо значение V ранна диагностикамеланом и неговите предшественици В ядрото с нормален набор от изследваните гени и хромозома 6 се наблюдават два гена RREB1, оцветени в червено, два гена MYB, оцветени в жълто, два гена CCND1, подчертани зелено, и две центромери на хромозома 6, обозначени син. За диагностични цели се използват флуоресцентни тестове.
Оценка на резултатите от реакцията: количеството червени, жълти, зелени и сини сигнали в 30 ядра от всяка проба се преброяват, идентифицират се четири параметъра различни опции генетични нарушения, при които пробата е генетично съвместима с меланома. Например, една проба е в съответствие с меланома, ако средният брой CCND1 ген на ядро е ≥2,5. Броят на копията на други гени се оценява по същия принцип. Едно лекарство се счита за FISH положително, ако е изпълнено поне едно от четирите условия. Проби, в които и четирите параметъра са под граничните стойности, се считат за FISH отрицателни.
Определянето на специфични ДНК последователности на хромозомите се извършва върху срезове от биопсии или хирургичен материал. На практика реакцията FISH изглежда така: изследваният материал, съдържащ ДНК в ядрата на меланоцитите, се обработва, за да се разруши частично неговата молекула, за да се разруши двойноверижната структура и по този начин да се улесни достъпът до желаната област на ген. Пробите се класифицират според това къде са прикрепени към ДНК молекулата. Материал за FISH реакция в клинична практикаИзползват се парафинови срезове от тъкани, петна и отпечатъци.
Реакцията FISH ви позволява да откриете промени, които са настъпили в молекулата на ДНК в резултат на увеличаване на броя на генните копия, загуба на ген, промени в броя на хромозомите и качествени промени- движение на генни локуси както на една и съща хромозома, така и между две хромозоми.
За обработка на данните, получени при използване на реакцията FISH и изследване на връзката между броя на копията на гените на трите изследвани групи, се използва корелационният коефициент на Spearman.
Меланомът се характеризира с увеличаване на броя на копията в сравнение с невуса и диспластичния невус.
Простият невус, в сравнение с диспластичния невус, има по-малко аномалии в броя на копията (т.е. по-нормален брой копия).
За да се конструират правила за вземане на решения, които позволяват да се предскаже дали пробата принадлежи към един или друг клас (диференциална диагноза на прости и диспластични невуси), се използва математическият апарат на „дърветата на решенията“. Този подход се е доказал добре на практика и резултатите от използването на този метод (за разлика от много други методи, като например невронни мрежи) могат да бъдат ясно интерпретирани за конструиране на правила за вземане на решения за диференциране на прости, диспластични невуси и меланом. Първоначалните данни във всички случаи бяха номерата на копията на четири гена.
Задачата за конструиране на решаващо правило за диференциална диагноза е разделена на няколко етапа. На първия етап се диференцират меланом и невус, без да се взема предвид вида на невуса. На следващия етап се изгражда решаващо правило за разделяне на прости и диспластични невуси. И накрая, на последния етап е възможно да се изгради „дърво на решенията“, за да се определи степента на дисплазия на диспластичния невус.
Това разделение на задачата за класифициране на невусите на подзадачи прави възможно постигането на висока точност на прогнозите на всеки етап. Входните данни за конструиране на „дърво на решенията“ са данни за броя на копията на четири гена за пациенти, диагностицирани с меланом, и пациенти, диагностицирани с немеланом (пациенти с различни видовеневус – прост и диспластичен). За всеки пациент има данни за броя на генните копия за 30 клетки.
По този начин разделянето на проблема за прогнозиране на диагнозата на няколко етапа позволява да се конструират изключително точни правила за вземане на решения не само за разграничаване на меланома от невуси, но също така и за определяне на вида на невусите и прогнозиране на степента на дисплазия за диспластичен невус. Конструираните „дървета на решенията“ са по визуален начинпрогнозиране на диагнозата въз основа на информация за броя на генните копия и може лесно да се използва в клиничната практика при диференциране на доброкачествени, премалигнени и злокачествени меланоцитни неоплазми на кожата. Предложено допълнителен методдиференциалната диагноза е особено важна при изрязване на гигантски вродени пигментирани невусии диспластични невуси при пациенти детство, от кога такива пациенти контактуват лечебни заведенияотбеляза висок процент диагностични грешки. Резултатите от използването на описания метод са много ефективни, препоръчително е да се използва при диагностицирането на пигментни кожни тумори, особено при пациенти със синдром на FAMM.