FISH тест: бърза диагностика на рак. Флуоресцентна in situ хибридизация Метод за изследване на риби
метод на хибридизация на място* (на място, лат.) се основава на способността на ДНК или РНК да образуват стабилни хибридни молекули с ДНК / РНК сонди директно върху препарати от фиксирани хромозоми и интерфазни ядра. Използвайки този метод, можете да определите точното местоположение на почти всяка ДНК или РНК последователност директно в клетката, клетъчно ядроили върху хромозомите.
За хибридизация. на мястоподходящи цитологични или хистологични препарати от клетки от всякакви тъкани или органи, приготвени съгласно стандартните методи. В клинична цитогенетична лаборатория се използват препарати от култивирани лимфоцити от периферна кръв, хорионепителни цитотрофобластни клетки, култивирани и некултивирани клетки от амниотична течност, различни тъкани от абортен материал, както и намазки от букален епител и кръвни клетки.
метод на хибридизация на място е от особено значение за практическата цитогенетика поради разработването на неизотопен вариант, базиран на използването на проби, маркирани с нерадиоактивни модифицирани нуклеотиди. Неизотопните варианти на хибридизация върху препарати (особено флуоресцентни) имат редица предимства в сравнение с изотопните: висока разделителна способност, равна на разделителната способност на микроскоп (0,1 - 0,2 μm), липса на необходимост от статистическа обработка на резултатите, бързина и безопасност за здравето на изследователите
В допълнение, комбинацията от различно модифицирани проби, открити с помощта на различни системиоткриване, ви позволява едновременно да определите местоположението на две или повече ДНК последователности в една клетка или на една метафазна плоча. А използването на повтарящи се последователности, маркирани с флуорохроми като ДНК сонди, намалява времето на процедурата до 7-9 часа (класическата безизотопна хибридизация отнема два дни, изотопните варианти от седмица до месец), което е особено важно за пренаталната диагностика. Използване FISH методв цитогенетичната диагностика позволява да се идентифицират структурни хромозомни пренареждания, да се установи естеството на маркерните хромозоми и да се анализират числените нарушения на хромозомния набор, както върху метафазните хромозоми, така и в интерфазните ядра.
Принцип на метода FISH
В основата FISH методлежи реакцията на хибридизация между изкуствено създадена ДНК проба и нейната комплементарна нуклеотидна последователност от ядрена ДНК. Молекулата на ДНК се състои от две спирално свързани нуклеотидни вериги и хибридизацията е възможна само ако веригите се разделят. За да се разединят нуклеотидните вериги на ДНК, се използва денатурация (за последваща хибридизация, както ДНК в ядрата на изследваната проба, така и самата ДНК сонда трябва да бъдат денатурирани). След денатуриране, ДНК сондата се хибридизира към своята комплементарна нуклеотидна последователност и може да бъде открита с помощта на флуоресцентен микроскоп.
По този начин, обща формапротокол за настройка РИБАможе да се представи в следната форма:
1. Изготвяне на хистологичен или цитологичен препарат.
Подготовка хистологичен препаратизвършено съгласно стандартна схема: изрязване, маркиране, окабеляване, изливане, микротомия, поставяне на среза върху предметно стъкло и депарафинизация. При приготвянето на цитологичен препарат се използват специални утаителни разтвори и центрофугиране, което позволява да се получи концентрирана клетъчна суспензия.
2. Предварителна обработка (при необходимост).
Препаратът се обработва от протеази, за да се елиминира наличието на протеини, които пречат на хибридизацията.
3. Поставяне на ДНК сонда върху препарата и последваща денатурация.
За да се денатурират сондата и пробата ДНК, те се третират с формамид и се нагряват до температура около 85-90°C.
4. Хибридизация.
След денатуриране лекарството се охлажда до определена температура (37°C в кутията клинични изследвания) и се инкубират във влажна камера за няколко часа (продължителността на инкубацията е посочена във всеки конкретен протокол). Понастоящем се използват автоматични хибридизатори за денатурация и хибридизация.
5. Измиване.
След като хибридизацията приключи, несвързаните проби трябва да бъдат отмити, което иначе би създало фон, който затруднява оценката на резултатите от FISH. За промиване обикновено се използва разтвор, съдържащ цитрат и натриев хлорид (SSC).
6. Контраоцветяване.
С помощта на флуоресцентни багрила (DAPI - 4,6-диамидин-2-фенилиндол; пропидиев йодид) се оцветява цялата ядрена ДНК.
7. Анализ на резултатите с помощта на флуоресцентен микроскоп. Рутинните операции (депарафинизиране, предварителна обработка, измиване) могат да бъдат автоматизирани.
* - Материалът е изготвен въз основа на информация от открити източници.
Предлага клиника Assuta. Флуоресцентната хибридизация, иначе наричана FISH (FISH), е генетичен тест, който дава представа за природата на тумора. Чрез изследване на неоплазма по метода FISH, лекарят установява дали ракът е положителен или отрицателен по отношение на HER2 гена. Копия на гена, присъстващи в клетките на тялото, стимулират растежа на атипичните ракови клетки. След поставяне на диагнозата лекарят ще може да състави най-подробния план за лечение.
Модерният лабораторен комплекс на клиниката Assuta извършва FISH (FISH) анализ за оценка на патологиите на рака на гърдата:
- Уникалното изследване дава точна представа за естеството на тумора, неговите характеристики.
- Една частна болница има мощни ресурси за постигане на резултати.
- Работим най-добрите лекариИзраел, диагностиката и терапията се провеждат по индивидуални схеми.
Обадете се, за да разберете как да кандидатствате за лечение. Възстановете здравето си в най-голямата болница в Близкия изток.
Запишете се за консултация
Рибен тест за рак на гърдата - механизъм за развитие на онкология
HER2 генните рецептори са отговорни за производството на HER2 протеини, които са рецептори, намиращи се в раковите клетки. Когато рецепторите се активират, раковите клетки получават сигнал за необходимостта от делене и размножаване. Обикновено HER 2 рецепторите регулират растежа на клетките на гърдата, поддържайки баланса на здравето в тъканите.
Въпреки това е доказано, че генът HER 2 се произвежда свръхпродукция при всеки пет случая на онкология. Това означава, че вместо едно копие на ген, човек има ген от всеки родител. Това обяснява излишъка от HER рецептори в тялото, причиняващ неконтролиран и агресивен растеж на тумора.
Преминаването на рибен анализ за рак на гърдата е необходимо, за да се установи доколко причината за развитието на патологията в тялото е свързана с ненормалното производство на рецептори. Трябва да знаете дали типът рак е HER2 положителен или отрицателен. Има лечения, специално предназначени за рак на гърдата с положителен HER 2 рецептор. Анализът ви позволява да не губите време в търсене на ефективни методи за въздействие.
Когато се извършва реакция на риба за рак на гърдата, лекарят използва профилни петна за визуализиране хромозомни нарушения. Разтворът, приложен върху изследваните тъкани, дава възможност да се видят аномалии. Предимството на FISH анализа е, че може да открие генетични аномалии, които са твърде малки, за да бъдат изследвани под микроскоп с алтернативни методи.
Друго предимство на тестването е, че пациентът получава резултатите след няколко дни, докато други методи дават съответствие само след няколко седмици. В допълнение към определянето на злокачествен тумор на млечната жлеза, тестът за риба се използва при диагностицирането на раковата патология на пикочния мехур, при определянето на левкемия.
Видове анализи
За да определят положителния или отрицателния характер на HER2, лекарите от клиниката Assuta насочват пациента за изследване в собствената си лаборатория. Има два вида тестове:
- Имунохистохимия – IHC разкрива голям бройкатерица. По време на теста патологът изследва тъканите под микроскоп, като използва специални петна. Не се изисква допълнително тестване за резултат 1+ или резултат 0. Резултат 2+ се счита за неопределен, при който е необходимо преминаване по-нататъшно тестване. Резултат 3+ потвърждава негативния сценарий.
- MOG тестът (хибридизация) е следващата стъпка в случай на съмнение за онкология. Важно е анализът да се извърши от опитен патолог, което ще премахне грешките при дешифрирането на резултатите. Има два основни вида тестове - тестът с риба за рак на гърдата и методът на светлото поле. Положителният рибен тест е окончателният метод за диагностика.
Много рядко анализът на рибата е неясен или двусмислен. При този набор от обстоятелства е необходима друга биопсия и нова реакция на риба при рак на гърдата, за да се потвърди диагнозата.
Как е рибният тест за рак на гърдата - ръководство за пациента
За компетентна диагностика на статуса HER 2 лекарят извършва биопсия, по време на която отстранява проби от тъкани, променени от патология. В повечето случаи се използва локална анестезияза облекчаване на дискомфорта. Впоследствие извлечената тъкан се изпраща за изследване в лабораторията, където с нея работи патологът. Много е важно лабораторията да е авторитетна в медицинската среда, защото животът на пациента пряко зависи от правилната диагноза. Доказано е, че рибният тест за рак на гърдата е безопасна процедура. Не изисква много време, отделни процедури с изключение на биопсия и допълнителна тъканна травма.
Защо изобщо се прави IHC тест? По-лесно е и достъпно. Въпреки това, ако анализите са неубедителни, FISH тестът е задължителен. В редки случаи е възможна повторна биопсия с вземане на проби. Но това наистина се случва рядко. Ако тестът за рак на гърдата при риби е положителен за HER2, ще Ви бъде предписано ефективно лечение HER2 позитивен рак. Въпреки факта, че това е агресивна форма на патология, перспективите за хората с тази диагноза в последните годинисе подобри значително. Свързва се с нов ефективни методилечение на рак на гърдата в Израел, насочено към HER 2 рецепторите.
Кандидатствайте за лечение
Определяне на HER-2 туморен статус по FISH метод- изследване на предразположеността към развитие на тумори и избор на своевременно адекватно лечение на рак на гърдата (РМЖ) или рак на стомаха (РГ).
HER-2 (HER-2/neu)- рецепторът на човешки епидермален растежен фактор-2 е протеин, който може да повлияе на растежа на раковите клетки. Създава се от специален ген, наречен HER-2/neu ген. HER-2 е рецепторът за специфичен растежен фактор, наречен човешки епидермален растежен фактор, естественосъществуващи в човека. Когато човешкият епидермален растежен фактор се прикрепи към HER-2 рецепторите на раковите клетки на гърдата, той може да стимулира растежа и деленето на тези клетки. В здрава тъкан HER-2 предава сигнали, които регулират клетъчната пролиферация и оцеляване, но свръхекспресията на HER-2 може да доведе до злокачествена клетъчна трансформация.
Хиперекспресията на HER-2 при някои подвидове рак на гърдата води до повишена пролиферация и ангиогенеза, дисрегулация на апоптозата (генетично програмирано самоунищожение на клетките). Доказано е, че свръхекспресията на този рецептор в туморната тъкан при рак на гърдата е свързана с по-агресивен ход на заболяването, повишен метастатичен потенциал на тумора и по-малко благоприятна прогноза. Откриването на връзката на свръхекспресията на HER-2 с лошата прогноза за рак на гърдата доведе до търсенето на такива подходи за лечение, които са насочени към специфично блокиране на онкогена HER-2/neu (таргетна анти-HER2 терапия).
Рак на гърдата (BC) - злокачествен туморжлезиста гръдна тъкан. RZhM заема първо място сред всички злокачествени заболявания при жените.
В зависимост от наличието на биологични маркери на тумора - експресията на хормонални рецептори (естроген и/или прогестерон), се изолират експресията на HER-2 - хормон-рецептор-положителен, HER-2-положителен и тройно негативен рак на гърдата.
HER-2/neu-позитивните (HER-2+) видове рак на гърдата се характеризират с висока експресия на HER-2/neu протеина.
HER=2/neu-отрицателни (HER-2-) видове рак на гърдата се характеризират с ниска експресия или липса на HER-2/neu протеин.
Изчислено е, че една на всеки пет жени с рак на гърдата е HER-2 положителна. Повечето видове рак на гърдата са хормонално зависими: естрогените и прогестеронът имат стимулиращ ефект върху тях (пролиферативен и неопластичен). При HER-2-позитивен рак на гърдата има излишък от HER-2 рецептори на повърхността на туморните клетки. Това явление се нарича "положителен HER-2 статус" и се диагностицира при 15-20% от жените с рак на гърдата.
НЕЯ-2- рецептор на човешки епидермален растежен фактор тип 2, който присъства в тъканите и нормално, участващ в регулацията на клетъчното делене и диференциация. Неговият излишък върху повърхността на туморните клетки (хиперекспресия) определя бързия неконтролиран растеж на неоплазмата, висок риск от метастази и ниска ефективност на някои видове лечение. HER-2 позитивният рак на гърдата е особено агресивна форма тази болест, Ето защо точно определениеСтатусът HER-2 е от ключово значение за избора на тактика на лечение.
Рак на стомаха (SC)- злокачествен тумор, произхождащ от епитела на стомашната лигавица.
Ракът на стомаха е на 4-то място в структурата на онкологичната заболеваемост и на 2-ро място в структурата на онкологичната смъртност в света. Честотата на рак на стомаха при мъжете е 2 пъти по-висока, отколкото при жените. Русия принадлежи към регионите с високо нивозаболеваемост и смъртност от това заболяване. Диагностика на гастроезофагеална ранни стадиитрудно поради дългия асимптоматичен ход на заболяването. Често ракът на стомаха се открива в късните етапи, когато 5-годишната преживяемост не надвишава 5-10%, а химиотерапията остава единственото лечение.
Основният метод за лечение на рак на стомаха е хирургически. Въпреки това, при повечето пациенти в момента на диагностициране се определя широко разпространен туморен процес, което прави невъзможно извършването му радикална операцияи изисква системно лекарствена терапия. Провеждането на химиотерапия статистически значимо повишава общата преживяемост на пациентите с метастазирал рак на стомаха, като подобрява качеството им на живот.
Онкогенът HER-2 (erbB-2) първоначално е идентифициран в тумори на гърдата. Амплификацията и свръхекспресията на този ген е относително специфично събитие за карциноми на гърдата и практически не се среща при тумори с други локализации. Ракът на стомаха изглежда е едно от малкото изключения: активирането на HER-2 се отбелязва в приблизително 10-15% от случаите. злокачествени новообразуванияна този орган и корелира с агресивния ход на заболяването.
Свръхекспресията на HER-2 е лош прогностичен фактор. Според различни проучвания амплификацията на гена HER-2 при пациенти с рак на стомаха корелира с ниски нива на обща преживяемост.
Методът FISH се използва за оценка на статуса на HER-2 при GC и BC.
РИБА- изследването ви позволява да определите качествените и количествените промени в хромозомите за диагностика на злокачествени кръвни заболявания и солидни тумори.
Днес изследванията FISH се използват широко в целия свят.
FISH метод (флуоресцентна хибридизация in situ) - изследване на броя на HER-2/neu-гените в раковите клетки.
Показания:
- рак на гърдата - за целите на прогнозата и избора на терапия;
- рак на стомаха - за целите на прогнозата и избора на терапия.
Определя се от лекуващия лекар.
Необходими са хистологичен протокол и имунохистохимичен протокол, IHC стъкло.
Тълкуване на резултатите
Резултатите от теста FISH се изразяват, както следва:
1. Положително ( повишено съдържание, има амплификация на гена HER-2):
- HER-2 позитивен рак на гърдата;
- HER-2 негативен рак на гърдата.
Рак на млечната жлеза - опасна болест, което според статистиката е на първо място сред раковите заболявания при жените. Рискът от развитие на това заболяване се увеличава при всички жени над 40-годишна възраст и може да се дължи на няколко други фактора. Сред най вероятни причинипоявата на рак на гърдата включва затлъстяване, генетична или наследствена предразположеност, ранен стартменструация и тяхното късно завършване, хормонална или лъчева терапия.
В допълнение, рискът от заболеваемост е повишен при нераждали жени и жени, които вече са имали рак. Мъжете също могат да развият рак на гърдата.
Видове и методи за диагностика
Първата стъпка при диагностицирането на рак на гърдата е рутинен преглед при мамолог. Жените над 40 години трябва да се подлагат на тези прегледи поне веднъж на две години. Лекарят извършва визуален преглед, палпация и мамография на млечните жлези. Визуалните признаци на развитието на заболяването могат да бъдат:
Главна информация
Рентгенографията на гърдата (мамография) ви позволява да определите наличието, размера и местоположението на тумора. За да се подобри точността на получените резултати, технологията на въвеждане контрастно вещество. Ако туморът вече е открит, тогава се използва методът на пневмоцистография - отстраняване на туморната течност и въвеждане на въздух в кухината. Ако наличието на тумор не е уточнено, тогава се използва дуктография - въвеждане на контрастно вещество в млечните канали.
Тези методи ви позволяват да визуализирате наличието на образувания в тъканите на млечната жлеза.
Ако наличието на тумор стане очевидно и при мамография, пациентката се насочва към набор от диагностични мерки:
На ултразвук лекарят може да различи тумор от киста и да изясни локализацията на образуването. След това от него се взема тъканна проба за биопсия. Биопсията ви позволява да разберете вида на образуването: доброкачествено или злокачествено, както и да определите дали туморът е хормонално зависим. Тази информация позволява на лекаря да вземе решение за стратегия за лечение, но не винаги дава възможност да се определи етапът. Често, дори и при всички необходими диагностични мерки, е възможно да се определи само след операцията.
Механизмът на хистологичните изследвания
Преди и след операцията се извършва тъканна биопсия. Процедурата се извършва след изясняване на локализацията на образованието.
Биопсията е процес на отстраняване на парче тъкан и нейното изследване се нарича " хистологично изследванеили просто "хистология".
Медицински работник, използвайки специална игла, взема малко количество тъкан от неоплазмата или туморът, който вече е отстранен от тялото на пациента, се изпраща за хистологично изследване. След това тъканният фрагмент се оцветява и обработва по специален начин, за да се увеличи контраста и да се улесни изследването. Срезът се изследва под микроскоп от специалист и дава заключение за качеството на туморната формация. Много в това изследване зависи от вниманието и квалификацията на лаборанта, който дава заключението.
Свързано изследване е имунохистохимията. Като цяло може да се нарече и "хистология", т.к. методът се основава на изследване на тъкани, но имунохистохимията е по-напреднал метод за анализ. Тъканта в това изследване също се оцветява със специални реактиви, които не само подобряват визуалния контраст, но и се комбинират („маркират“) с антитела по специален начин, което прави възможно изясняването голямо количествохарактеристики на неоплазмата. Реакцията в този случай се случва много по-бързо, което ви позволява бързо да получите резултатите от анализа.
Имунохистохимията позволява не само да се изясни вида на неоплазмата, но и да се планира стратегия за лечение на пациента въз основа на откриването на чувствителността на туморната тъкан към различни видоветерапевтично въздействие. В допълнение, провеждането на това изследване е възможно най-автоматизирано, което свежда до минимум вероятността от диагностична грешка поради човешкия фактор.
Съществуват и съвременни диагностични мерки, които позволяват да се открие наличието на тумор в тялото: това е спектрален анализ на кръвта, имунологичен (биохимичен) анализ, FISH тест на туморна тъкан. Генетичният кръвен тест позволява на всяка жена да провери наличието или липсата на предпоставки за възникване на рак на гърдата. CT и MRI ви позволяват точно да определите локализацията на тумора и да проследите динамиката на неговото развитие, да оцените структурата на неоплазмата.
Как да открием рак чрез кръвен тест?
Кръвният тест се предписва главно от лекар след ултразвуково изследване. Има ситуации, когато пациент по собствена инициатива дарява кръв на маркери на прозорци или генетичен анализза да определите дали сте изложени на риск от рак на гърдата. В някои случаи общ анализкръвта може да послужи като причина за контакт с онкологичния диспансер (заедно с палпиране на уплътнението или визуални знацирак).
Биохимичен анализ
Кръвта като материал за изследване позволява следните диагностични мерки:
В същото време само първите два анализа могат да се нарекат специализирани методи за определяне на рак, вторият от които е по-скоро превантивна мяркаотколкото оперативно. Основно преди операцията се правят два други кръвни теста, за да се определи състоянието на организма и степента на процеса. Въпреки това, както вече беше споменато, ако се усети уплътнение в гърдите и в същото време общ кръвен тест показва повече от два отрицателни диагностични коефициента, това е причина да се свържете с специалист. Отрицателните коефициенти са показатели извън нормата в определени параметри на кръвния състав.
Биохимичен кръвен тест разкрива наличието на антитела срещу туморни клетки. Такива тела се наричат туморни маркери. Броят и видът на туморните маркери зависи от спецификата (локализацията) на раковия тумор и стадия на неговото развитие. Туморните маркери включват:
В случай на рак на гърдата, лекуващият лекар ще се интересува преди всичко от наличието на туморен маркер CA-15-3, тъй като присъствието му в кръвта недвусмислено показва заболяване от рак на гърдата. Дешифрирането на резултата отнема средно един ден. Биохимичен анализ се извършва няколко пъти в хода на заболяването. Кръвта за него се взема от вената сутрин на гладно. Две седмици преди изследването пациентът спира приема на всички лекарства(уточнява се от лекуващия лекар). Два дни преди кръводаряването не можете да приемате алкохол, мазни и пържени храни.
Един час преди процедурата не можете да пушите и е желателно да намалите емоционалния стрес. Кръв върху биохимичен анализобикновено не се отказват веднага след облъчване и физиотерапия.
Дефиниция на генетични фактори
Преди да говорим за генетичен кръвен тест, трябва да се подчертае разликата между понятията "генетичен" и "наследствен". Генетичният фактор за появата на рак е по-широко понятие, което предполага не само наличието на роднини с рак на гърдата, но и специфична генна мутация, поради която рискът от това заболяване се увеличава.
Наследственият фактор предполага потенциален риск от рак на гърдата въз основа на фамилна анамнеза. В същото време не само жените, но и мъжете могат да получат мутантен ген, но неговият носител не е задължително да се разболее.
Всяка жена може да се подложи на генетичен анализ. Това се препоръчва особено за тези, чиито преки роднини са имали рак на гърдата. Преди процедурата за даряване на кръв за анализ, специалист в областта на генетиката трябва да разговаря с пациента, който ще обясни нюансите на дешифрирането на резултатите. Не се изисква специална подготовка от пациента преди кръводаряване.
В случай на получаване положителен резултатмутации в BRCA гените, но при липса на др симптоми на тревожност, няма място за паника. За жени с мутация в тези гени могат да се препоръчат редовни самоизследвания и физически прегледи като превантивни мерки. След 40 години има смисъл да се мисли за премахване на яйчниците и гърдите, жените по-млада възрасткоито не планират да имат деца в бъдеще, понякога препоръчват да вземат контрацептиви. Решението за тези мерки е изцяло на раменете на самата жена и изисква обмислен подход и консултация с лекари.
Най-новите диагностични методи
Спектрален анализкръвта разкрива наличието на неоплазми в тялото с вероятност до 93%. Това е сравнително евтин диагностичен метод, базиран на инфрачервено облъчване на кръвен серум и анализ на неговия молекулен състав.
Заключението за спектралния анализ на кръвта се дава на принципа "наличие-отсъствие" и е насочено към идентифициране на повечето видове злокачествени тумори. Също така, това изследване е в състояние да определи етапа на развитие на рак на гърдата. Интерпретацията на резултатите се извършва в лаборатория и не изисква допълнително лекарско мнение.
За да дарите кръв за спектрален анализ, е необходимо да завършите приема на лекарства 2 месеца преди процедурата. От момента на рентгеново или друго облъчване, както и химиотерапия, трябва да минат най-малко 3 месеца. Освен това жената не трябва да е бременна или да има менструация по време на вземането на кръвната проба. Вземането на кръв се извършва сутрин на празен стомах. Спектралният анализ на кръвта отнема средно 12 работни дни.
Един от най-новите методидиагностицирането на ракови заболявания е така нареченият "фиш тест" (FISH, флуоресцентна хибридизация). Ефективността му все още се дискутира, основният проблем за неговата осъществимост е скъпата изследователска процедура. Същността на метода се състои в маркиране на клетъчни фрагменти с флуоресцентен състав и по-нататък микроскопско изследванеклетки. Според това с кои части от генетичния материал са се свързали белязаните фрагменти, може да се разбере дали пациентът има предразположеност към рак и какви методи на лечение ще бъдат подходящи в конкретния случай.
Тестът FISH не изисква напълно зрели клетки, така че този анализ е много по-бърз от другите лабораторни тестове. В допълнение, методът FISH ви позволява по-ясно да наблюдавате генетичните увреждания, което не е възможно с други видове анализи. Тестът FISH най-често се използва специално за откриване на рак на гърдата, но работи и за откриване на някои други видове. онкологични заболявания.
Недостатъците на FISH теста включват, освен високата му цена, невъзможността да работи върху някои части от хромозомите поради специфичността на белезите. В допълнение, тестът FISH игнорира определени видове мутации и повреди. генетичен код, което може да бъде важен пропуск в диагнозата. Сравнителните проучвания на FISH с по-евтиния IHC тест не показват значителни предимства при определяне на чувствителността към Herceptin на раковите клетки. Въпреки това тестът FISH в момента е най-бързият сред високопрецизните методи за диагностициране на рак.
Техниката FISH, флуоресцентна in situ хибридизация, е разработена в средата на 80-те години на миналия век и се използва за откриване на наличието или отсъствието на специфични ДНК последователности върху хромозомите, както и алфа ДНК сателита, разположен върху центромера на хромозома 6, CEP6 (6p11.1-q11.1).
Това доведе до значителна промяна в диагностиката на онкологичните заболявания с меланоцитен произход поради откриването на туморни антигени. На фона на злокачествено заболяване се определя мутация в три антигена: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) и CMM1 (1p). В тази връзка възможността за обектив диференциална диагноза, въз основа на определянето на генетичните характеристики на меланоцитните кожни тумори, има голямо значение V ранна диагностикамеланом и неговите прекурсори.В ядрото с нормален набор от изследвани гени и хромозома 6, два гена RREB1, оцветени в червено, два гена MYB, оцветени в жълто, изолирани два гена CCND1 в зелено, и двете центромери на хромозома 6, маркирани син цвят. За диагностични цели се използват флуоресцентни проби.
Оценка на резултатите от реакцията: броят на червените, жълтите, зелените и сините сигнали в 30 ядра от всяка проба се преброява, разкриват се четири параметъра различни опции генетични нарушенияпри което пробата е генетично съвместима с меланома. Например, проба съответства на меланом, ако средният брой CCND1 ген на ядро е ≥2,5. Броят на копията на други гени се оценява по същия принцип. Едно лекарство се счита за FISH-положително, ако е изпълнено поне едно от четирите условия. Проби, в които и четирите параметъра са под граничните стойности, се считат за FISH-отрицателни.
Определянето на специфични ДНК последователности върху хромозомите се извършва върху срезове от биопсични проби или хирургически материал. На практика реакцията FISH е следната: тестовият материал, съдържащ ДНК в ядрата на меланоцитите, се обработва, за да се разруши частично неговата молекула, за да се разруши двойноверижната структура и по този начин да се улесни достъпът до желаната генна област. Пробите се класифицират според мястото на прикрепване към ДНК молекулата. Материал за FISH реакция в клинична практикаса парафинови тъканни срезове, петна и отпечатъци.
Реакцията FISH ви позволява да откриете промени, които са настъпили в молекулата на ДНК в резултат на увеличаване на броя на копията на ген, загуба на ген, промени в броя на хромозомите и качествени промени- движение на генни локуси както в една и съща хромозома, така и между две хромозоми.
За обработка на данните, получени чрез реакцията FISH и изследване на връзката между броя на копията на гените на трите изследвани групи, се използва корелационният коефициент на Spearman.
Меланомът се характеризира с увеличаване на броя на копията в сравнение с невуса и диспластичния невус.
Простият невус, в сравнение с диспластичния невус, има по-малко аномалии в броя на копията (т.е. повече нормални копия).
За да се изградят правила за вземане на решения за предсказване дали дадена проба принадлежи към определен клас (диференциална диагноза на прости и диспластични невуси), се използва математическият апарат на „дърветата на решенията“. Този подход се е доказал на практика и резултатите от прилагането на този метод (за разлика от много други методи, като например невронни мрежи) могат да бъдат ясно интерпретирани за изграждане на правила за вземане на решения за диференциране на прости, диспластични невуси и меланом. Първоначалните данни във всички случаи бяха номерата на копията на четири гена.
Задачата за конструиране на решаващо правило за диференциална диагностика е разделена на няколко етапа. На първия етап се диференцират меланом и невус, без да се взема предвид вида на невуса. На следващия етап се изгражда решаващо правило за разделяне на прости и диспластични невуси. И накрая, на последния етап е възможно да се изгради "дърво на решенията", за да се определи степента на дисплазия на диспластичния невус.
Такова разделение на задачата за класифициране на невусите в подзадачи позволява да се постигне висока точност на прогнозите на всеки етап. Входните данни за конструиране на дървото на решенията са данни за броя на копията на четири гена за пациенти, диагностицирани с меланом, и пациенти, диагностицирани с немеланом (пациенти с различни видовеневус – прост и диспластичен). За всеки пациент са налични номера на генни копия за 30 клетки.
По този начин разделянето на задачата за прогнозиране на диагнозата на няколко етапа позволява изграждането на правила за вземане на решения с висока точност не само за разграничаване на меланома от невуси, но и за определяне на вида на невусите и прогнозиране на степента на дисплазия за диспластичен невус. Конструираните "дървета на решенията" са по визуален начинпрогнозиране на диагнозата въз основа на броя на генните копия и може лесно да се използва в клиничната практика при диференциране на доброкачествени, премалигнени и злокачествени меланоцитни кожни неоплазми. Предложено допълнителен методдиференциалната диагноза е особено важна при изрязване на гигантски вродени пигментирани невусии диспластични невуси при пациенти детство, откога се насочват такива пациенти лечебни заведенияпразнува висок процент диагностични грешки. Резултатите от използването на описания метод са много ефективни, препоръчително е да се използва при диагностицирането на пигментни кожни тумори, особено при пациенти със синдром на FAMM.