Mikroorganismide identifitseerimine antigeense struktuuri järgi. "Kuningad saavad teha kõike..." või mitmesuguseid bakteriomadusi
Mikrobioloogia: loengukonspektid Tkachenko Ksenia Viktorovna
2. Mikroorganismide antigeenid
2. Mikroorganismide antigeenid
Nakkuslikud antigeenid on bakterite, viiruste, seente, algloomade antigeenid.
On olemas järgmist tüüpi bakteriaalsed antigeenid:
1) rühmaspetsiifiline (leitud erinevad tüübid sama perekond või perekond)
2) liigispetsiifiline (leitud aastal erinevad esindajadüks tüüp)
3) tüübispetsiifilised (määrata seroloogilised variandid - serovarid, antigenovaad - sama liigi piires).
Sõltuvalt lokaliseerimisest bakterirakus on:
1) O-AG - polüsahhariid; on osa bakteriraku seinast. Määrab rakuseina lipopolüsahhariidi antigeense spetsiifilisuse; see eristab sama liigi bakterite serovariante. A-AG on nõrgalt immunogeenne. See on termiliselt stabiilne (talub keetmist 1–2 tundi), keemiliselt stabiilne (talub töötlemist formaliini ja etanooliga);
2) lipiid A - heterodimeer; sisaldab glükoosamiini ja rasvhape. Sellel on tugev adjuvant, mittespetsiifiline immunostimuleeriv toime ja toksilisus;
3) H - AG; on osa bakteriaalsest flagellast, selle aluseks on flagelliinvalk. Termolabiilsed;
4) K - AG - bakterite pinna-, kapsliantigeenide heterogeenne rühm. Need on kapseldatud ja seotud rakuseina lipopolüsahhariidi pinnakihiga;
5) toksiinid, nukleoproteiinid, ribosoomid ja bakteriaalsed ensüümid.
Viiruse antigeenid:
1) superkapsiidi antigeenid - pinna kest;
2) valgu- ja glükoproteiini antigeenid;
3) kapsiid - kest;
4) nukleoproteiini (tuuma) antigeenid.
Kõik viiruse antigeenid on T-sõltuvad.
Kaitsvad antigeenid on antigeensete determinantide (epitoopide) kogum, mis põhjustab kõige tugevama immuunvastuse, mis kaitseb organismi selle patogeeniga uuesti nakatumise eest.
Nakkuslike antigeenide kehasse tungimise viisid:
1) kahjustatud ja mõnikord terve naha kaudu;
2) läbi nina, suu, seedetrakti, kuseteede limaskestade.
Heteroantigeenid on antigeensed kompleksid, mis on ühised erinevate liikide esindajatele või ühised antigeensed determinandid kompleksidel, mis erinevad muude omaduste poolest. Heteroantigeenide tõttu võivad tekkida immunoloogilised ristreaktsioonid.
Mikroobid mitmesugused ja inimestel on ühised antigeenid, mis on struktuurilt sarnased. Neid nähtusi nimetatakse antigeenseks mimikriks.
Superantigeenid on spetsiaalne antigeenide rühm, mis väga väikestes annustes põhjustavad suure hulga T-lümfotsüütide polüklonaalset aktivatsiooni ja proliferatsiooni. Superantigeenid on bakteriaalsed enterotoksiinid, stafülokokk, koolera toksiinid, mõned viirused (rotaviirused).
Raamatust Mikrobioloogia: loengukonspektid autor Tkatšenko Ksenia Viktorovna Raamatust Mikrobioloogia autor Tkatšenko Ksenia ViktorovnaLOENG № 4. Mikroorganismide geneetika. Bakteriofaagid 1. Bakterite pärilikkusaine korraldus Bakterite pärilikkusaparaati esindab üks kromosoom, milleks on DNA molekul, see spiraalitakse ja volditakse ringiks. See on ühel hetkel sõrmus
Raamatust Ökoloogia autor Mitchell PaulLOENG № 11. Antigeenid 1. Antigeenide omadused ja tüübid Antigeenid on makromolekulaarsed ühendid. Allaneelamisel põhjustavad nad immuunreaktsiooni ja interakteeruvad selle reaktsiooni saadustega: antikehade ja aktiveeritud lümfotsüütidega.Antigeenide klassifikatsioon.1. Kõrval
Raamatust Bioloogia [Täielik juhend eksamiks valmistumiseks] autor Lerner Georgi Isaakovitš2. Mikroorganismide süstemaatika ja nomenklatuur Bakterite taksonoomia peamiseks taksonoomiliseks üksuseks on liik. standardtingimused avaldub sarnaste morfoloogiliste,
Raamatust Teekond mikroobide maale autor Betina VladimirMIKROORGANISMIDE ÖKOLOOGIA Inimestele avaldab muljet suured suurused. Ilmselt seetõttu kujutame juura perioodi meenutades ennekõike ette hiiglaslikke dinosauruseid, kes kunagi meie planeeti "valitsesid". Kui aga Maad "valitsevad" mingid organismid, siis see
Raamatust Populaarne mikrobioloogiast autor Bukhar Mihhail Raamatust Elu äärel autor Denkov Veselin A.6. Mikroorganismide elu ja surm Elu on C. Bernardi mikroobide looming liikumises. Leeuwenhoek, teavitades Londoni Kuninglikku Seltsi vaadeldud "loomadest", kirjutas, et neid eristab nende võime väga kiiresti liikuda. Oleme juba öelnud, et
Autori raamatustMikroorganismide kasv ja paljunemine Nagu XIX sajandi kuulus prantsuse füsioloog Claude Bernard ütles, on elu loomine. Elusorganismid erinevad elutu loodus peamiselt kasvamise ja paljunemise teel. Nende kasvu ja paljunemist on sellistel kõige paremini jälgida
Autori raamatustMikroorganismide eluea piirid Mikroobide eluiga ja paljunemine sõltuvad paljudest teguritest. välised tegurid. Temperatuur on peamine keskkond. Madalaim meile teadaolev temperatuur, mille juures molekulide ja aatomite soojusliikumine peatub, on
Autori raamatustMikroorganismide taluvuspiir Seega oleme juba õppinud, et mikroobid taluvad olulisi temperatuurikõikumisi, palju suuremaid kui inimesed. Vaatame, kuidas nad reageerivad muudele ebasoodsatele tingimustele Õhurõhk merepinnal ja 45 ° geograafilise nurga all
Autori raamatustMikroorganismide sõprus Mikroobide maailma kõige eriilmelisemate esindajate seas on välja kujunenud ka "sõbralikud", sümbiootilised suhted. Huvitav on näiteks mõne alglooma ja vetika suhe. Ripslaste rakkudes elavad sageli sümbiootilised rohelised või
Autori raamatust12. peatükk Mikroorganismide levimus Me oleme pimedus ja pimedus ja pimedus. A. Blok Mikroorganisme leidub kõikjal. Õhus, vees, pinnases – ja igal pool on neid väga palju. Piisab, kui öelda, et ainult ühes kuupsentimeetris risosfäärist (see on otsene pinnase osa
Autori raamatustAnabioos ja talvine puhkeperiood mikroorganismide maailmas ja taimede maailmas Looduses ei ole anabioos ainult loomsete organismide patent. See on laialdaselt esindatud ka Prokaryotae kuningriigi mikroorganismide hulgas, mis hõlmavad igat tüüpi baktereid ja sinivetikaid. Anabioos
Biokeemilised omadused enamasti tüüpilised perekonnale Salmonella. Iseloomulikud tunnused on: gaasi moodustumise puudumine S. Typhi kääritamise ajal, S. Paratyphi A võimetus toota vesiniksulfiidi ja dekarboksülaadi lüsiini.
Epidemioloogia.Kõhutüüfus ja paratüüfus on antroponoosid, st. põhjustada haigusi ainult inimestel. Nakkuse allikaks on haige või bakterikandja, kes vabastab patogeeni väliskeskkonda koos väljaheite, uriini, süljega. Nende nakkuste tekitajad, nagu ka teised salmonellad, on väliskeskkonnas stabiilsed, püsivad pinnases ja vees. S. Typhi võib muutuda mittekultiveerimiseks. Nende paljunemiseks on soodne keskkond toiduained(piim, hapukoor, kodujuust, hakkliha, tarretis). Patogeeni edasikandumine toimub vee kaudu, mis praegu mängib olulist rolli, samuti toidu kaudu ja kontakti kaudu. Nakkuslik annus on ligikaudu 1000 rakku. Inimeste loomulik vastuvõtlikkus nendele infektsioonidele on kõrge.
Patogenees ja kliiniline pilt. Kord sisse peensoolde, tüüfuse ja paratüüfuse patogeenid tungivad limaskestale, kui
efektorvalgud TTSS-1, mis moodustavad Peyeri plaastrites nakkuse peamise fookuse. Tuleb märkida, et sisse submukoosne kesta osmootne rõhk võrreldes soole valendikuga on madalam. See aitab kaasa Vi-antigeeni intensiivsele sünteesile, mis suurendab patogeeni fagotsüütivastast aktiivsust ja pärsib põletikueelsete kudede vahendajate vabanemist submukoosse rakkude poolt. Selle tagajärjeks on põletikulise kõhulahtisuse puudumine varajased staadiumid infektsioonid ja mikroobide intensiivne paljunemine makrofaagides, mis põhjustab Peyeri plaastrite põletikku ja lümfadeniidi teket, mille tulemuseks on mesenteriaalse barjäärifunktsiooni rikkumine lümfisõlmed ja salmonella tungimine verre, mille tulemuseks on baktereemia. See langeb kokku inkubatsiooniperioodi lõpuga, mis kestab 10-14 päeva. Baktereemia ajal, mis kaasneb kogu palavikuperioodiga, kanduvad tüüfuse ja paratüüfuse tekitajad verevooluga kogu kehas, settides parenhüümsete organite retikuloendoteliaalsetesse elementidesse: maksas, põrnas, kopsudes ja ka luuüdis, kus nad paljunevad makrofaagides. Maksa Kupfferi rakkudest satuvad salmonellad sapiteede kaudu, kuhu nad difundeeruvad, sapipõide, kus nad ka paljunevad. sisse kuhjudes sapipõie, salmonella põhjustab selle põletikku ja nakatab peensoole uuesti sapivooluga. Salmonella taastoomine Peyeri plaastritesse viib neis hüperergilise põletiku tekkeni vastavalt Arthuse nähtuse tüübile, nende nekroosile ja haavanditele, mis võivad põhjustada soolestiku verejooks ja sooleseina perforatsioon. Patogeenide võime kõhutüüfus ja paratüüfoid püsivad ja paljunevad fagotsüütilistes rakkudes, kusjuures viimaste funktsionaalne puudulikkus põhjustab bakterikandja moodustumist. Salmonella võib ka kaua aega püsivad sapipõies, erituvad väljaheitega pikka aega ja saastavad keskkonda. Haiguse 2. nädala lõpuks hakkab patogeen organismist väljutama uriini, higi ja emapiimaga. Kõhulahtisus algab 2. haigusnädala lõpus või 3. nädala alguses, sellest ajast külvatakse haigustekitajad välja roojast.
Sissejuhatus.Identifitseerimine- mikroobi liigilise kuuluvuse määramine (kehtestamine). Praegu põhineb üldtunnustatud tuvastamismeetod teatud kõige olulisemate kogumi uurimisel fenotüüpsed tunnused uuritud mikroorganism. Identifitseerimise kriteeriumiks on antud liigile iseloomulike põhitunnuste (taksonomeetriliste tunnuste) olemasolu mikroobis. Liigi rajamine toimub rahvusvahelise bakterite taksonoomia järgi (Bergey's Manual of Systematic Bacteriology).
TO liigi peamised omadused bakterite hulka kuuluvad:
Mikroobiraku morfoloogia;
Tinktori omadused - värvimisomadused lihtsate ja keerulised meetodid värvimine;
Kultuurilised omadused – mikroobide kasvu tunnused toitainekeskkonnas;
V biokeemilised tunnused - erinevate keemiliste ühendite sünteesiks või lõhustamiseks (kääritamiseks) vajalike ensüümide olemasolu bakterites.
Bakterioloogilises praktikas uuritakse kõige sagedamini sahharolüütilisi ja proteolüütilisi ensüüme.
TO lisafunktsioonid, identifitseerimiseks kasutatakse järgmist:
Liigispetsiifiliste antigeenide olemasolu (vt ptk 10);
Tundlikkus liigispetsiifiliste bakteriofaagide suhtes (vt ptk 5);
Liigi resistentsus teatud antimikroobsete ainete suhtes (vt 8. peatükk);
Sest patogeensed bakterid- teatud virulentsustegurite tootmine (vt 9. peatükk).
Peen liigisisene identifitseerimine kuni biovariani (serova-ra, fagovar, fermentovar jne) - tiitrimine - vastava markeri tuvastamise alusel: antigeen (serotüüpimine, vt ptk 10), tundlikkus tüüpilise bakteriofaagi suhtes (faagi tüpiseerimine, vt ptk 5) jne.
IN viimased aastad välja töötatud ja kasutusele võetud kaasaegsed biokeemilised ja molekulaarbioloogilised identifitseerimismeetodid: kemoidentifitseerimine, nukleiinhapete analüüs: restriktsioonianalüüs, hübridisatsioon, polümeraas ahelreaktsioon(PCR), ribotüpiseerimine jne.
▲ Tunniplaan
▲ Programm
1. Bakterite tuvastamine.
2. Aeroobsete ja anaeroobsete bakterite biokeemiliste omaduste uurimine.
▲ Demo
1. Külvamata "kirju rida".
2. "Kirjuva rea" muutmise võimalused.
3. "Motley row" anaeroobsete bakterite jaoks.
4. Mikromeetod bakterite biokeemiliste omaduste uurimiseks.
5. Pigmenti tootvate bakterite kasv.
▲ Ülesanne õpilastele
1. Joonista valikud "kirjurea" muutmiseks.
2. Hinnake puhaskultuuri sõelumise tulemusi: pange tähele nakatatud kultuuri kasvu olemasolu või puudumist, samuti võõrbakterite olemasolu.
3. Veenduge, et isoleeritud kultuur oleks puhas, selleks valmistage äigepreparaadi ja värvige see Grami meetodil.
4. Asetage katalaasi proov klaasile ja hinnake selle tulemust.
5. Võtta arvesse isoleeritud puhaskultuuride biokeemilise aktiivsuse määramise tulemusi.
6. Tuvastage isoleeritud mikroobid identifitseerimistabeli abil uuritud morfoloogiliste, tooniliste, kultuuriliste ja ensümaatiliste omaduste põhjal.
▲ Juhised
Biokeemiline tuvastamine. Bakterite biokeemilise aktiivsuse hindamiseks kasutatakse järgmist: reaktsioonid:
1) käärimine - substraadi mittetäielik lagunemine
Vaheproduktid, näiteks süsivesikute kääritamine orgaaniliste hapete moodustumisega;
2) oksüdatsioon - orgaanilise substraadi täielik lagunemine CO 2-ks ja H2O-ks;
3) assimilatsioon (utiliseerimine) - substraadi kasutamine kasvuks süsiniku või lämmastiku allikana;
4) substraadi dissimilatsioon (lagundamine);
5) substraadi hüdrolüüs.
Klassikaline (traditsiooniline) meetod mikroobide tuvastamiseks biokeemiliste omaduste järgi seisneb puhaskultuuri inokuleerimises teatud substraate sisaldavale diferentsiaaldiagnostika söötmele, et hinnata mikroorganismi võimet seda substraati omastada või määrata. lõpptooted tema ainevahetus. Uuring võtab aega vähemalt 1 päev. Näitena võib tuua bakterite sahharolüütilise aktiivsuse (võime kääritada süsivesikuid) hindamine Hissi söötmele külvamise teel – lühike ja pikk "kirju rida".
Bakterite identifitseerimine biokeemiliste omaduste järgi, kasutades "kirevat seeriat" söödet. Lühike "kirju seeria" sisaldab vedelat Hissi söödet mono- ja disahhariididega: glükoos, laktoos, sahharoos, maltoos ja 6-hüdroksüülse alkoholiga - mannitool. Pikas "kirjus reas" koos loetletud süsivesikutega tutvustatakse söödet, mis sisaldab mitmesuguseid monosahhariide (arabinoos, ksüloos, ramnoos, galaktoos jne) ja alkohole (glütserool, dultsitool, inositool jne). Bakterite süsivesikute kääritamise võime hindamiseks lisatakse söötmele indikaator (Andrede reaktiiv või muu), mis võimaldab tuvastada happeliste lõhustumisproduktide (orgaaniliste hapete) moodustumist, ja "ujuk" vabanemise tuvastamiseks.
alates 2 .
Uuritud mikroorganismi puhaskultuur külvatakse silmusega "kireva rea" söötmesse. Kultuure inkubeeritakse temperatuuril 37°C 18-24 tundi või kauem.Kui bakterid fermenteerivad süsivesikuid happeliste saaduste moodustamiseks, siis täheldatakse söötme värvuse muutust, süsivesikute lagunemisel happelisteks ja gaasilisteks saadusteks koos värvimuutus, ujukisse ilmub gaasimull. Kui kasutatakse poolvedela agariga söödet, registreeritakse gaasi moodustumine kolonni purunemisega. Fermentatsiooni puudumisel söötme värvus ei muutu. Kuna bakterid ei käärita kõiki, vaid ainult teatud süsivesikuid, mis on Hiss-söötme osa, iga tüübi puhul kindlad, on pilt üsna kirju, mistõttu süsivesikute ja värviindikaatoriga söötmete komplekti nimetatakse "kirjuks reaks". " (joonis 3.2.1; vahetükil).
Sest proteolüütiliste ensüümide määramine toota bakterikultuuri süstimisega 10–20% želatiini kolonni,
peptoonvesi. Želatiinis olevaid külvi inkubeeritakse 20–22 °C juures mitu päeva. Proteolüütiliste ensüümide juuresolekul bakterid vedeldavad želatiini, moodustades lehtrit või kalasaba meenutava kuju.
Peptoonvees* põllukultuuridel määratakse aminohapete lõhusaadused pärast 2-3-päevast inkubeerimist temperatuuril 37 °C seadistamise teel. reaktsioonid ammoniaagile, indoolile, vesiniksulfiidile ja jne.
reaktsioon ammoniaagile. Korgi alla kinnitatakse kitsas lakmuspaberi riba, et see ei puutuks kokku toitainekeskkonnaga. Sinine paber näitab ammoniaagi moodustumist.
Reaktsioon indoolile. Ehrlichi meetod: bakterikultuuriga katseklaasi lisatakse 2-3 ml eetrit, sisu segatakse intensiivselt ja lisatakse paar tilka Erlichi reaktiivi ( alkoholi lahus paradimetüülamidobensaldehüüd vesinikkloriidhappega). Indooli juuresolekul täheldatakse roosat värvumist, ettevaatlikul kihilisusel moodustub roosa ring (vt joonis 3.2.1).
reaktsioon vesiniksulfiidile. Kitsas raudsulfaadiga niisutatud filterpaberi riba asetatakse peptoonveega katseklaasi ja kinnitatakse korgi alla nii, et see ei puutuks kokku toitekeskkonnaga. Vesiniksulfiidi vabanemisel tekib lahustumatu raudsulfiid (FeS), mis muudab paberi mustaks (vt joonis 3.2.1). H 2 S tootmist saab määrata ka bakterikultuuri inokuleerimise teel kolonni süstimise teel H 2 S tuvastamiseks mõeldud reaktiive sisaldava toitekeskkonnaga (soolade segu: raudsulfaat, naatriumtiosulfaat, naatriumsulfit). Positiivne tulemus- sööde omandab FeS moodustumise tõttu musta värvi.
katalaasi tuvastamine. Klaasklaasile kantakse tilk 1-3% vesinikperoksiidi lahust ja sinna viiakse bakterikultuuriga silmus. Katalaas lagundab vesinikperoksiidi hapnikuks ja veeks. Gaasimullide vabanemine näitab katalaasi olemasolu seda tüüpi bakterites.
Bakterioloogilises praktikas piirduvad need mõnikord uuritud bakterite sahharolüütiliste ja proteolüütiliste omaduste uurimisega, kui sellest piisab nende tuvastamiseks. Vajadusel uurige muid märke, näiteks nitraatide taastamise võimet, aminohapete karboksüülimist, oksüdaasi, plasmakoagulaasi, fibrinolüsiini ja teiste ensüümide moodustumist.
Isoleeritud kultuuri identifitseerimise töö tulemused registreeritakse (tabel 3.2.1).
Teise põlvkonna biokeemilised testid, mis põhinevad kontsentreeritud substraatide ja reaktsiooni lõpp-produktide tuvastamise tundlikumatel meetoditel,
Iga mikroorganism, ükskõik kui primitiivne see ka poleks, sisaldab mitut antigeeni. Mida keerulisem on selle struktuur, seda rohkem võib selle koostises leida antigeene. Erinevates samadesse süstemaatilistesse kategooriatesse kuuluvates mikroorganismides on
rühmaspetsiifilised antigeenid - leidub sama perekonna või perekonna erinevates liikides, liigispetsiifilised - sama liigi erinevates esindajates ja tüübispetsiifilised (variant) antigeenid - in erinevaid valikuid sama liigi sees. Viimased jagunevad seroloogilisteks variantideks ehk serovarideks. Bakteriaalsetest antigeenidest eristatakse H, O, K jne. Erinevat tüüpi mikroorganismide antigeenid erinevad üksteisest järsult struktuurilt ja koostiselt. Kõige paremini uuritud on bakterite antigeenne mosaiik, milles eristan somaatilisi O- ja Vi-antigeene, ümbris-, kapsli- (K), flagella- (H), kaitse- ja ribosomaalseid. Reeglina on need kõik keerulised valguühendid. Seega sisalduvad pinnastruktuurides somaatilised O- ja Vi-antigeenid bakterirakud ja on tihedalt seotud lipopolüsahhariididega. Shell-antigeenid tekivad O-antigeenide toimel, kuid erinevalt viimastest koosnevad need termolabiilsetest ja termostabiilsetest fraktsioonidest. Kapsli K-antigeene esindavad valkained (Anthrax) või komplekssed polüsahhariidid (Streptococcus, Klebsiella). Flagellar H-antigeenid on valgud, ribosomaalsed ja kaitsvad - valkude ja nukleiinhapete kompleksühendid. Antigeenid on ka bakterite endo- ja eksotoksiinid.
Bakterite antigeense struktuuri tundmine võimaldas saada mitmeid diagnostilisi ja terapeutilised seerumid kasutatakse vastavalt mikroobide liikide määramiseks ja nakkushaiguste raviks
haigused.
Lipulised H-antigeenid. Need antigeenid on osa bakterite flagellast. H-antigeen on flagelliini valk. See hävib kuumutamisel ja pärast fenooliga töötlemist säilitab oma antigeensed omadused.
Somaatiline O antigeen. Varem arvati, et O-antigeen on suletud raku sisusse, selle soma, ja seetõttu nimetati seda somaatiliseks antigeeniks. Seejärel selgus, et see antigeen on seotud bakteriraku seinaga. Gramnegatiivsete bakterite O-antigeen on seotud rakuseina LPS-iga. Selle kompleksse kompleksantigeeni määravad rühmad on selle põhiosa külge kinnitatud polüsahhariidahelate terminaalsed korduvad ühikud. Suhkrute koostis determinantrühmades ja ka nende arv ei ole erinevatel bakteritel ühesugune. Enamasti sisaldavad need heksoose (galaktoos, glükoos, ramnoos jne), aminosuhkrut (N-atsetüülglükoosamiin). O antigeen on kuumakindel: säilib 1-2 tundi keetes, ei hävi pärast töötlemist formaliini ja etanooliga. Kui loomi immuniseeritakse eluskultuuridega, millel on flagellad, tekivad O- ja H-antigeenide vastased antikehad ning keedetud kultuuriga immuniseerimisel tekivad antikehad ainult O-antigeeni vastu.
K-antigeenid (kapsel). Neid antigeene on hästi uuritud Escherichia ja Salmonella puhul. Need, nagu O-antigeenid, on tihedalt seotud rakuseina ja kapsli LPS-iga, kuid erinevalt O-antigeenist sisaldavad need peamiselt happelisi polüsahhariide: glükuroon-, galakturoon- ja teisi uroonhappeid. Temperatuuritundlikkuse järgi jagunevad K-antigeenid A-, B- ja L-antigeenideks. Termiliselt kõige stabiilsemad on A-antigeenid, mis taluvad keetmist üle 2 tunni, B-antigeenid taluvad tund aega temperatuuril 60 °C kuumutamist ja L-antigeenid hävivad kuumutamisel 60 °C-ni. K antigeenid paiknevad pinnapealsemalt kui O-antigeenid ja varjavad sageli viimaseid. Seetõttu on O-antigeenide tuvastamiseks vaja K-antigeenid esmalt hävitada, mis saavutatakse kultuuride keetmisega. Niinimetatud Vi-antigeen kuulub kapsli antigeenide hulka. Seda leidub tüüfuses ja mõnedes teistes kõrge virulentsusega enterobakterites, millega seoses nimetatakse seda antigeeni virulentsusantigeeniks. Polüsahhariidi iseloomuga kapsli antigeene leiti pneumokokkides, Klebsiellas ja teistes bakterites, mis moodustavad väljendunud kapsli. Erinevalt rühmaspetsiifilistest O-antigeenidest iseloomustavad need sageli antud liigi teatud tüvede (variantide) antigeenseid tunnuseid, mis on selle alusel jaotatud serovarideks. Siberi katku batsillides koosneb kapsli antigeen polüpeptiididest.
Bakteriaalsete toksiinide antigeenid. Bakteriaalsetel toksiinidel on täisväärtus antigeensed omadused juhul, kui need on valgulised lahustuvad ühendid. Bakterite toodetud ensüümidel, sealhulgas patogeensusfaktoritel, on täielike antigeenide omadused. Tõsist tähelepanu tuleks pöörata kaitsvatele antigeenidele, mis on madala toksilisusega ja tagavad arvukate blokeerivate antikehade tootmise. Head antigeenid on toksoidid, mis saadakse eksotoksiinidest, neutraliseerides need formaliiniga.
Kaitsevad antigeenid. Esmakordselt tuvastati mõjutatud koe eksudaadis ajal siberi katk. Neil on tugevalt väljendunud antigeensed omadused, mis tagavad immuunsuse vastava nakkustekitaja suhtes. Kaitsvaid antigeene moodustavad ka mõned teised mikroorganismid, kui nad sisenevad peremeesorganismi, kuigi need antigeenid ei ole nende püsivad komponendid.
Viiruse antigeenid. Iga viiruse virion sisaldab erinevaid antigeene. Mõned neist on viirusspetsiifilised. Teiste antigeenide koostis sisaldab peremeesraku komponente (lipiidid, süsivesikud), mis sisalduvad selle väliskestas. Lihtsate virionide antigeenid on seotud nende nukleokapsiididega. Omal moel keemiline koostis need kuuluvad ribonukleoproteiinide või desoksüribonukleoproteiinide hulka, mis on lahustuvad ühendid ja seetõttu nimetatakse neid S-antigeenideks (solutio-solution). Kompleksselt organiseeritud virionides on mõned antigeensed komponendid seotud nukleokapsiididega, teised välisümbrise glükoproteiinidega. Paljud lihtsad ja keerulised virioonid sisaldavad spetsiaalseid pinna V-antigeene – hemaglutiniini ja ensüümi neuraminidaasi. Hemaglutiniini antigeenne spetsiifilisus on viiruseti erinev. See antigeen tuvastatakse hemaglutinatsioonireaktsioonis või selle variandis - hemadsorptsioonireaktsioonis. Teine hemaglutiniini omadus avaldub antigeenses funktsioonis, mis põhjustab antikehade - antihemaglutiniinide moodustumist ja nendega hemaglutinatsiooni inhibeerimise reaktsiooni (HITA).
Viiruse antigeenid võivad olla rühmaspetsiifilised, kui neid leidub sama perekonna või perekonna erinevates liikides, ja tüübispetsiifilised, mis on omased sama liigi üksikutele tüvedele. Neid erinevusi võetakse viiruste tuvastamisel arvesse. Koos loetletud antigeenidega võivad viirusosakeste koostises esineda ka peremeesraku antigeenid. Näiteks kana embrüo allantoisi membraanil kasvanud gripiviirus reageerib allantoisivedeliku jaoks valmistatud antiseerumiga. Sama viirus, mis on võetud nakatunud hiirte kopsudest, reageerib antiseerumiga lihtsad andmed loomad ja ei reageeri allantoisivedeliku antiseerumiga.
Heterogeensed antigeenid (heteroantigeenid). Need on tavalised või interspetsiifilised (spetsiifilisuselt sarnased) antigeenid. Need avastas esmakordselt J. Forssman. Küüliku immuniseerimine neerude vesiekstraktiga Merisiga, põhjustas ta seerumis rühmaantikehade moodustumise, mis reageerisid lamba erütrotsüütidega. Lisaks selgus, et Forssmanni antigeen on lipopolüsahhariid ja seda leidub hobuste, kasside, koerte ja kilpkonnade organites. Tavalisi antigeene leidub inimese erütrotsüütides ja püogeensetes kokkides, enterobakterites, rõugeviirustes, gripis ja teistes mikroorganismides. Erinevat tüüpi rakkude antigeense struktuuri ühist rühma nimetatakse antigeenne mimikri . Antigeense miimika korral immuunsüsteem Inimene kaotab võime kiiresti ära tunda võõrsilti ja tekib immuunsus, mille tulemusena võivad patogeensed mikroobid mõnda aega organismis vabalt paljuneda. Antigeenset matkimist kasutatakse selleks, et õigustada patogeensete mikroobide pikaajalist ellujäämist patsiendi organismis või püsivust, resistentsete (resistentsete) mikroobide kandumist ja isegi vaktsineerimisjärgseid tüsistusi.Tavalised antigeenid, mida leidub erinevat tüüpi mikroorganismide, loomade ja taimede esindajatel. nimetatakse heterogeenseteks. Näiteks Forsmani heterogeenset antigeeni leidub merisea organite valgustruktuurides, jäära erütrotsüütides ja salmonellas.
Sõltuvalt nende spetsiifilisusest jagatakse bakteriaalsed antigeenid järgmisteks osadeks homoloogne - liigi- ja tüübispetsiifiline ja heterogeenne - rühm, liikidevaheline.
Liigid ja eriti tüübiantigeenid on väga spetsiifilised. Vastuseks nende sattumisele loomade kehasse toodetakse ainult selliseid antikehi, mis reageerivad antigeenidega. teatud liiki või mitmesugused mikroobid.
Mikroobide tuvastamine on allikast eraldatud kultuuri süstemaatilise asukoha määramine liigi või variandi tasemel. Kultiveerimismeetodi käigus isoleeritud kultuuri puhtuses veendumisel hakkavad nad seda identifitseerima, tuginedes võtmetele (st teadaolevale ensümaatilise aktiivsuse loetelule, teadaolevale antigeensele struktuurile), kirjeldatud tüüpi tüvede klassifikatsioonile ja iseloomustusele. juhendites.
Identifitseerimiseks kasutatakse funktsioonide komplekti: morfoloogiline(kuju, suurus, struktuur, lipu olemasolu, kapslid, eosed, vastastikune kokkulepe määrdunud), tinctorial(Grami peits ja muud meetodid), keemiline(G+C DNA-s ja sisaldus, nt peptidoglükaan, tselluloos, kitiin jne), kultuuriline(toitumisvajadused, tingimused, kiirus ja kasvu iseloom eri söötmetel), biokeemiline(ensümaatiline lagunemine ja muundumine erinevaid aineid vahe- ja lõpptoodete moodustamisega), seroloogiline(antigeenne struktuur, spetsiifilisus, assotsiatsioonid), keskkonna(virulentsus, toksikogeensus, toksilisus, mikroobide ja nende saaduste allergeensus, vastuvõtlike loomade ja muude biosüsteemide hulk, tropism, liikidevahelised ja liigisisesed suhted, keskkonnategurite mõju, sh faagid, bakteriotsiinid, antibiootikumid, antiseptikumid, desinfektsioonivahendid).
Mikroorganismide tuvastamisel ei ole vaja uurida kõiki omadusi. Pealegi on majanduslikust seisukohast oluline, et testitavate testide hulk ei ületaks vajaliku; samuti on soovitav kasutada lihtsaid (kuid usaldusväärseid) teste, mis on kättesaadavad paljudele laboritele.
Mikroorganismide tuvastamine algab kultuuri määramisest suurtele taksonitele (tüüp, klass, järg, perekond). Selleks piisab sageli kultuuriallika, morfoloogiliste ja kultuuriliste omaduste, Grami või Romanovsky-Giemsa plekkide määramisest. Perekonna, liigi ja eriti variandi kindlakstegemiseks on vaja kohaldada biokeemiliste, seroloogiliste, ökoloogilised märgid. Mikroobide tuvastamise skeemid on märkimisväärselt erinevad. Seega on bakterite tuvastamisel rõhk biokeemilistel ja seroloogilistel omadustel, seentel ja algloomadel - rakkude ja kolooniate morfoloogilistel omadustel. Viiruste tuvastamisel kasutatakse genoomi spetsiifilisuse kindlakstegemiseks molekulaarse hübridisatsiooni meetodit, samuti spetsiaalseid seroloogilisi teste.
Bakterite puhaskultuuri biokeemiline identifitseerimine toimub diferentsiaaldiagnostika söötme abil. Diferentsiaaldiagnostika söötmed sisaldavad substraati mis tahes mikroobis tuvastatud ensüümi jaoks ja indikaatorit, mis fikseerib pH muutuse kasvukeskkond ja värvige see happelistele või aluselistele pH väärtustele iseloomulikes värvides (joonis 2.1).
Joonis 2.1. Näide Enterobacteriaceae perekonna esindajate biokeemilisest (ensümaatilisest) aktiivsusest. Söötmele lisati indikaator bromofenoolsinist, neutraalsete pH väärtuste korral on sööde rohuroheline, happelistel väärtustel kollane, aluselise pH väärtustel sinine. indool - aluseline toode, ureaasi olemasoluga kaasneb uurea teke (aluselised pH väärtused), süsivesikute kääritamisega kaasneb happe moodustumine. Positiivne test vesiniksulfiidi puhul kaasneb söötme mustaks muutumine spetsiaalse reagendi toime tõttu
Seroloogiline tuvastamine tähendab uuritud mikroobikultuuri antigeense spetsiifilisuse ja antigeense valemi määramist - bakterite antigeense struktuuri sümboolset kuvamist. Näiteks S. typhi antigeenne struktuur on tähistatud kui O9,12:Vi:Hd; üks E. coli serovaridest kui O111:K58:H2. Antigeenne valem määratakse aglutinatsioonikatses klaasil, kasutades monoretseptorite antiseerumite komplekti, s.o. spetsiifiliste bakteriaalsete antigeenide vastased antikehad. Uuritavate antigeenidena kasutatakse kasvatatud bakterikultuuri, iga mikroob on korpuskulaarne antigeen, mis annab spetsiifiliste antikehade lisamisel aglutinatsiooni fenomeni. Kapslibakterite uurimisel tekivad mõned probleemid: kapsel kaitseb somaatilist antigeeni, mistõttu selle bakterikultuuri soojendatakse uuringu jaoks. Kuumus aitab kaasa termolabiilse kapsli hävimisele ja O-antigeen muutub tüpiseerimiseks kättesaadavaks. Klaasil aglutinatsioonireaktsiooni käivitamise tehnika. Tilk soolalahust (kontroll) ja tilk antiseerumit kantakse puhtale rasvavabale klaasile. Kui antiseerumeid on mitu, võetakse mitu klaasi. Igasse tilka sisestatakse bakterisilmuse abil mikroobikultuur. 1-3 minuti jooksul täheldatakse aglutinaatide ilmumist, mis tekivad teatud antikehade spetsiifilisel seondumisel bakteriaalsete antigeenidega ja nende järgneval seostumisel suurteks. silmaga nähtav helbed.