Правила работы с микроскопом. Особенности использования цифрового микроскопа на уроках биологии Микроскоп описание устройства
Микроскопы - это приборы, предназначенные для получения увеличенных изображений мелких объектов а также их фотографий (микрофотографий). Микроскоп должен выполнять три задачи: показывать увеличенное изображение препарата, разделять детали на изображении и визуализировать их для восприятия человеческим глазом или камерой. Эта группа инструментов включает в себя не только сложные приборы из нескольких линз с объективами и конденсорами, но и очень простые одиночные устройства, которые легко держать в руках, такие как увеличительное стекло. В данной статье мы рассмотрим устройство микроскопа и его основные детали.
Устройство и основные части оптического микроскопа
Функционально устройство микроскопа делится на 3 части:
Система освещения
Система освещения необходима для генерации светового потока, который подается на объект таким образом, чтобы последующие части микроскопа максимально точно выполняли свои функции для построения изображения. Осветительная система прямого микроскопа проходящего света расположена под объектом в прямых микроскопах (например, лабораторные, поляризационные и др.) и над объектом в инвертированных.
Осветительная система микроскопа включает источник света (галогеновая лампа или светодиод и электрический блок питания) и оптико-механическую систему (коллектор, конденсор, полевая и апертурная регулируемые/ирисовые диафрагмы).
Оптика микроскопа
Предназначена для воспрои зведения препарата в плоскости изображения с требуемым для исследования качеством изображения и увеличения (т. е. для построения такого изображения, которое точно и во всех деталях воспроизводило бы объект с соответствующим оптике микроскопа разрешением, увеличением, контрастом и цветопередачей).
Оптика обеспечивает первую ступень увеличения и расположена после объекта до плоскости изображения микроскопа.
Оптика микроскопа включает в себя объектив и промежуточные оптические модули (компенсаторы, модули промежуточного увеличения, анализаторы).
Современные микроскопы базируются на оптических системах объективов, скорректированных на бесконечность (Olympus UIS2). Для работы в этой оптической системе применяются тубусы, которые фиксируют параллельные пучки света, выходящие из объектива и «собирают» в плоскости изображения микроскопа.
Визуализирующая часть
Предназначена для получения реального изображения объекта на сетчатке глаза, фотоплёнке, на экране компъютера с дополнительным увеличением (вторая ступень увеличения).
Визуализирующая часть в виде тубуса с окулярами находится между плоскостью изображения объектива и глазами наблюдателя или цифровой камерой для микроскопии.
Тубусы у микроскопов бывают монокулярные, бинокулярные или тринокулярные. Тринокулярный тубус позволяет подключить камеру для микроскопии и делать фото и видео исследуемого образца с наилучшим качеством.
Для микроскопов также производятся проекционные насадки, в том числе дискуссионные для двух и более наблюдателей; рисовальные аппараты;
Анатомия прямого микроскопа
Схема расположения основных элементов оптического микроскопа Olympus BH2
Луч света от галогеновой лампы отражается и собирается коллекторной линзой для направления по оптическому пути. Так как лампа в процессе работы нагревается, в оптическом пути устанавливается тепловой фильтр для отсекания теплового излучения, идущего на препарпат. Галогеновая лампа меняет свой спектр в зависимости от подаваемого на неё напряжения,что сказывается на цветопередаче изображений, потому в оптическом пути обязательно используется цветобалансирующий фильтр для стабилизации цветовой температуры и обеспечения белого фона.
Зеркало направляет свет от осветителя на полевую диафрагму, которая регулирует диаметр пучка света, подаваемого на препарат.
Конденсор собирает полученный свет и направляет его на препарат, который установлен на предметном столике. Объектив микроскопа фокусируется с помощью ручек тонкой и грубой фокусировки на препарате и передает полученное изображение на призмы тубуса.
На микроскопе установлен тринокулярный тубус, имеющий светоделитель на окуляры и камеру. Пользователь через окуляры может исследовать препарат а также делать измерения с помощью объект-микрометра.
Через специальный адаптер на тринокулярный тубус устанавливается камера для создания микрофотографии. Плёночные фотокамеры устанавливались на микроскопе с начала ХХ века до изобретения цифровых фотокамер.
Разумеется, техника не стоит на месте и на сегодняшний день , которые легко устанавливаются на микроскоп и имеют даже большую функциональность, нежели их плёночные предшественники.
С конструктивно-технологической точки зрения, микроскоп состоит из следующих частей:
- Механическая часть;
- Оптическая часть;
1. Механическая часть микроскопа
Устройство микроскопа включает в себя раму (или штатив), который является основным конструктивно-механическим блоком микроскопа. Рама включает в себя следующие основные блоки: основание, механизм фокусировки, корпус лампы (или светодиода), держатель конденсора, предметный столик, револьвер объективов, слайдеры для установки фильтров и анализаторов.
В зависимости от модели микроскопа различают следующие системы освещения:
- Осветитель с зеркалом;
Для игрушечных и детских микроскопов все еще можно встретить осветитель с зеркалом, однако применение такого микроскопа весьма ограничено.
В бюджетных микроскопах (CKX31, CKX41, CX23) , которые применяются в биологии и медицине применяется упрощенное освещение. Принцип критического освещения состоит в том равномерно яркий источник света располагается непосредственно за полевой диафрагмой и с помощью конденсора изображается на плоскости предмета. Размер полевой диафрагмы подбирается так, чтобы ее изображение, точно было ограничено полем зрения окуляра (при малом увеличении объектива. В связи с тем, что критическое освещение не дает прямого хода лучей через весь оптический путь, разрешение при критическом освещении ниже, чем при освещении по методу Кёллера.
В микроскопах лабораторного класса и выше применяется система освещения по методу Кёллера. Принцип освещения по Кёллеру состоит в установке прямого хода луча по всей оптической оси микроскопа. Это дает максимальное разрешение и детализацию препарата. Именно при этой системе освещения оправдано подключать камеры для микроскопии для получения качественных микрофотографий.
Чисто механическим узлом микроскопа является предметный столик, предназначенный для крепления или фиксации в определенном положении объекта наблюдения. Столики бывают неподвижные, координатные и вращающиеся (центрируемые и нецентрируемые). В исследовательских микроскопах применяются также моторизованые столики, которые позволяют автоматизировать процесс съемки и отслеживать препарат в определенных координатах через промежутки времени.
2. Оптическая часть
Оптические элементы и аксессуары обеспечивают основную функцию микроскопа — создание увеличенного изображения объекта с достаточной степенью достоверности по форме, соотношению размеров составляющих элементов и цветопередаче. Кроме этого, оптика должна обеспечивать такое качество изображения, которое отвечает целям исследования и требованиям методик проводимого анализа.
Основными оптическими элементами микроскопа являются следующие оптические элементы: полевая диафрагма, конденсор, фильтры, объективы, компенсаторы, окуляры, адаптеры для камер.
Объективы
микроскопа являют собой оптические системы, предназначенные для построения микроскопического изображения в плоскости изображения с соответствующим увеличением, разрешением, точностью воспроизведения по форме и цвету объекта исследования. Объективы являются одними из ключевых частей микроскопа. Они имеют сложную оптико-механическую конструкцию, которая включает несколько одиночных линз и компонентов, склеенных из 2-х или 3-х линз.
Количество линз обусловлено кругом решаемых объективом задач. Чем выше качество изображения, даваемое объективом, тем сложнее его оптическая схема. Общее число линз в сложном объективе может доходить до 14 (например, это может относиться к планапохроматическому объективу UPLSAPO100XO с увеличением 100х и числовой апертурой 1,40).
Объектив состоит из фронтальной и последующей частей. Фронтальная линза обращена к препарату и является основной при построении изображения соответствующего качества.Она определяет рабочее расстояние и числовую апертуру объектива. Последующая часть в сочетании с фронтальной обеспечивает требуемое увеличение, фокусное расстояние и качество изображения, а также определяет парфокальную высоту объектива и длину тубуса микроскопа.
Конденсор.
Оптическая система конденсора предназначена для увеличения количества света, поступающего в микроскоп. Конденсор располагается между объектом (предметным столиком) и осветителем (источником света).
В учебных и простых микроскопах конденсор бывает несъемный и неподвижный. В остальных случаях конденсор является съемным адаптированным под конкретную задачу модулем. При настройке освещения (юстировке микроскопа) конденсор подвижен вдоль и перпендикулярно оптической оси.
В конденсоре всегда находится апертурная ирисовая диафрагма, которая влияет на контрастность изображения и разрешение.
Для работы применяются специальные конденсоры, приспособленные для методов фазового контраста, тёмного поля, ДИК, поляризационного контраста.
Окуляры
В общем виде окуляры состоят из двух групп линз: глазной — ближайшей к глазу наблюдателя — и полевой — ближайшей к плоскости, в которой объектив строит изображение рассматриваемого объекта.
Окуляры классифицируются по тем же группам признаков, что и объективы:
- окуляры компенсационного (К — компенсируют хроматическую разность увеличения объективов свыше 0,8%) и безкомпенсационного действия;
- окуляры обычные и плоского поля;
- окуляры широкоугольные (с окулярным числом — произведение увеличения окуляра на его линейное поле — более 180); сверхширокоугольные (с окулярным числом более 225);
- окуляры с вынесенным зрачком для работы в очках и без;
- окуляры для наблюдения, проекционные, фотоокуляры, гамалы;
- окуляры с внутренней наводкой (с помощью подвижного элемента внутри окуляра происходит настройка на резкое изображение сетки или плоскость изображения микроскопа; а также плавное, панкратическое изменение увеличения окуляра) и без нее.
В микроскопах Olympus используются широкопольные окуляры с полевым числом от 20 мм до 26.5 мм для работы в очках и без. Окуляры имеют электростатическую защиту и диоптрийную подстройку для комфортной работы.
3. Электрическая часть микроскопа
В современных микроскопах, вместо зеркал, используются различные источники освещения, питаемые от электрической сети. Это могут быть как обычные галогеновые лампы так ксеноновые и ртутные лампы для флуоресцентной (люминесцентной микроскопии). Также все большую популярность набирают светодиодные осветители. Они обладают некоторыми преимуществами перед обычными лампами, как например большой срок службы (осветитель микроскопа Olympus BX46 U-LHEDC имеет срок службы 20 000 ч), меньшее энергопотребление и др. Для питания источника освещения используются различные блоки питания, блоки розжига и другие устройства, преобразующие ток из электрической сети в подходящий для питания того или иного источника освещения.
РАЗДЕЛ: ЦИТОЛОГИЯ
ТЕМА:«УСТРОЙСТВО СВЕТОВОГО МИКРОСКОПА И ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ».
Форма организации учебного процесса: практическое занятие.
Место проведения: учебная комната.
Цель занятия: на основании знания устройства светового микроскопа освоить технику микроскопирования и приготовления временных препаратов.
Значимость изучаемой темы
Световая микроскопия – один из объективных методов биологических, медико-биологических и медицинских дисциплинах. Умение правильно пользоваться микроскопом, грамотно оценивать, интерпретировать, документировать (зарисовывать) наблюдаемую микроскопическую картину являются обязательным условием успешного освоения материала на практических занятиях по биологии, гистологии, патологической анатомии, микробиологии.
В результате работы на практическом занятии студент должен
знать:
· устройство светового микроскопа;
· правила работы со световым микроскопом.
уметь:
· работать со световым микроскопом на малом и большом увеличениях;
· готовить временный препарат;
· оформлять зарисовки микроскопических препаратов;
· оформлять протокол занятия.
Оснащение занятия:
Компьютер;
Проектор;
Презентация Power Point по теме;
Световой микроскоп;
Бинокуляр;
Микропрепараты (любые);
Предметные стекла;
Покровные стекла;
Чашки Петри;
Скальпель;
Марлевые салфетки;
Фильтровальная бумага;
Спиртовый раствор йода;
Луковица.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ЗАНЯТИЯ
РАБОТА № 1. УСТРОЙСТВО СВЕТОВОГО МИКРОСКОПА.
Задание 1:
- внимательно прочитайте содержание работы № 1 и изучите устройство светового микроскопа.
Рассмотрите основные части микроскопа: механическую, оптическую, осветительную.
К механической части относятся: штатив, предметный столик, тубус, револьвер, макро- и микрометрические винты.
Штатив состоит из массивного подковообразного основания, придающего микроскопу необходимую устойчивость. От середины основания вверх отходит тубусодержатель, изогнутый почти под прямым углом, к нему прикреплен тубус, расположенный наклонно.
На штативе укреплен предметный столик с круглым отверстием в середине. На столик помещают рассматриваемый объект (отсюда название «предметный»). На столике имеются два зажима, или клеммы, неподвижно фиксирующие препарат. По бокам столика расположены два винта – препаратовыделители, при вращении которых столик передвигаются вместе с объективом в горизонтальной плоскости. Через отверстие в середине столика проходит пучок света, позволяющий рассматривать объект в проходящем свете.
На боковых сторонах штатива, ниже предметного столика, найдите два винта, служащие для передвижения тубуса. Макрометрический винт, или кремальера, имеет большой диск и при вращении поднимает или опускает тубус для ориентировочной наводки на фокус. Микрометрический винт, имеющий наружный диск меньшего диаметра, при вращении перемещает тубус незначительно и служит для точной наводки на фокус. Вращать микрометрический винт можно только на полоборота в обе стороны.
Оптическая часть микроскопа представлена окулярами и объективами.
Окуляр (от лат. oculus - глаз) находится в верхней части тубуса и обращен к глазу. Окуляр представляет собой систему линз, заключенных в металлическую гильзу цилиндрической формы. По цифре на верхней поверхности окуляра можно судить о кратности его увеличения (Х 7, Х 10, Х 15). Окуляр можно вынимать из тубуса и заменять по мере надобности другим.
На противоположной стороне найдите вращающуюся пластинку, или револьвер (от лат. revolvo - вращаю), в которой имеется 3 гнезда для объективов. Как и окуляр, объектив представляет собой систему линз, заключенных в общую металлическую оправу. Объектив ввинчивается в гнездо револьвера. Объективы также имеют различную кратность увеличения, которая обозначается цифрой на его боковой поверхности. Различают: объектив малого увеличения (Х 8), объектив большого увеличения (Х 40) и имерсионный объектив, используемый для изучения наиболее мелких объектов (Х 90).
Общее увеличение микроскопа равно увеличению окуляра, умноженному на увеличение объектива. Таким образом, световой микроскоп имеет максимальную кратность увеличения 15 Х 90 или может максимально увеличивать в 1350 раз.
Осветительная часть микроскопа состоит из зеркала, конденсора и диафрагмы.
Зеркало укреплено на штативе ниже предметного столика и благодаря подвижному креплению его можно вращать в любом направлении. Это дает возможность использовать источники света, расположенные в различных направлениях по отношению к микроскопу, и направлять пучок света на объект через отверстие в предметном столике. Зеркало имеет две поверхности: вогнутую и плоскую. Вогнутая поверхность сильнее концентрирует световые лучи и поэтому используется при более слабом, искусственном освещении.
Конденсор находится между зеркалом и предметным столиком, он состоит двух-трех линз, заключенных в общую оправу. Пучок света, отбрасываемый зеркалом, проходит через систему линз конденсора. Меняя положение конденсора (выше, ниже), можно изменить интенсивность освещенности объекта. Для перемещения конденсора служит винт, расположенный кпереди от макро и микровинтов. При опускании конденсора освещенность уменьшается, при поднимании – увеличивается. Диафрагма, вмонтированная в нижнюю часть конденсора, также служит для регуляции освещения. Эта диафрагма состоит из ряда пластинок, расположенных по кругу и частично перекрывающих друг друга таким образом, что в центре остается отверстие для прохождения светового пучка. С помощью специальной ручки, расположенной на конденсоре с правой стороны, можно менять положение пластинок диафрагмы относительно друг друга и таким образом уменьшать или увеличивать отверстие и, следовательно, регулировать освещенность.
Слово «микроскоп » происходит от двух греческих слов «micros» — «маленький», «skopeo» — «смотрю». То есть, предназначение данного прибора – рассматривание маленьких объектов. Если давать более точное определение, то микроскоп – оптический прибор (с одной или несколькими линзами ), используемый для получения увеличенных изображений неких объектов, которые не видны невооруженным глазом.
К примеру, микроскопы , используемые в сегодняшних школах, способны увеличивать в 300-600 крат, этого вполне достаточно, чтобы разглядеть живую клетку в подробностях – можно увидеть стенки самой клетки, вакуоли, её ядро и т.д. Но для этого всего он прошел довольно длинный путь открытий, и даже разочарований.
История открытия микроскопа
Точное времени открытия микроскопа до сих пор не установлено, так как самые первые устройства для наблюдений маленьких объектов находили археологи в различных эпохах. Они выглядели как обычная лупа, то есть это была двояковыпуклая линза, дающая увеличение изображения в несколько раз. Уточню, что самые первые линзы были изготовлены не из стекла, а из некого прозрачного камня, поэтому говорить о качестве изображений не приходится.
В дальнейшем были уже изобретены микроскопы , состоящие из двух линз. Первая линза – это объектив, она обращалась к изучаемому предмету, а вторая линза – окуляр, в который смотрел наблюдатель. Но изображение объектов всё равно было сильно искажено, вследствие сильных сферических и хроматических отклонений – свет преломлялся неравномерно, и из-за этого картинка была нечеткая и окрашенная цветом. Но все же, даже тогда увеличение микроскопа было в несколько сот крат, что немало.
Система линз в микроскопах была значительно усложнена только в самом начале 19-го века, благодаря работе таких физиков как Амичи, Фраунгофера и др. В устройстве объектива уже применялась сложная система, состоящая из собирающих и рассеивающих линз. Причем, эти линзы были из разных видов стекла, компенсировавших недостатки друг друга.
Микроскоп ученого из Голландии, Левенгука имел уже предметный столик, куда складывались все изучаемые объекты, а также был винт, который позволял этот столик плавно перемещать. Потом уже было добавлено зеркало – для лучшего освещения объектов.
Строение микроскопа
Существуют простые и сложные микроскопы. Простой микроскоп представляет собой одну систему линз, именно такой является обычная лупа. Сложный же микроскоп сочетает в себе две простые линзы. Сложный микроскоп , соответственно, дает большее увеличение, и к тому же, он обладает большей разрешающей способностью. Именно наличие данной способности (разрешающей) дает возможность различать детали образцов. Увеличенное же изображение, где не различить подробности, даст немного полезной нам информации.
Сложные микроскопы имеют двухступенчатые схемы. Одна система линз (объектив ) под носится близко к объекту – она, в свою очередь, создает разрешенное и увеличенное изображение объекта. Потом, изображение уже увеличивается другой системой линз (окуляром ), она помещается, непосредственно, ближе к глазу наблюдателя. Данные 2 системы линз располагаются на противоположных концах тубуса микроскопа.
Современные микроскопы
Современные же микроскопы могут давать колоссальное увеличение – до 1500-2000 крат, при этом качество изображения будет прекрасное. Также имеют довольно большую популярность бинокулярные микроскопы, в них изображение от одного объектива раздваивается, при этом на него можно смотреть сразу двумя глазами (в два окуляра). Это позволяет еще намного лучше различать зрительно мелкие детали. Подобные микроскопы используются обычно в разных лабораториях (в т.ч и в медицинских ) для исследований.
Электронные микроскопы
Электронные же микроскопы помогают нам «рассмотреть» изображения отдельных атомов. Правда, слово «рассмотреть» применено здесь относительно, так как глазами напрямую мы не смотрим — изображение объекта появляется вследствие сложнейшей обработки компьютером полученных данных. Устройство микроскопа (электронного) основывается на физических принципах, а также способе «ощупывания» поверхностей объектов тончайшей иглой, у которой кончик толщиной всего лишь в 1 атом.
USB-микроскопы
В настоящее время, во время развития цифровых технологий, каждый человек может приобрести насадку-объектив на камеру своего мобильного телефона, и делать фотографии любых микроскопических объектов. Еще есть очень мощные USB-микроскопы, при подключение к домашнему компьютеру, позволяющие рассмотреть получившееся изображение на мониторе.
Большинство цифровых фотоаппаратов способны делать снимки в режиме макросъёмки , с помощью нее Вы сможете сделать фото мельчайших объектов. А если поместить небольшую собирающую линзу перед объективом вашего фотоаппарата, то можно легко получить увеличение фотографии до 500 крат.
Сегодня новые технологии помогают увидеть то, что буквально сто лет назад было недоступно. Части микроскопа на протяжение всей его истории постоянно усовершенствовались, и в настоящее время мы видим микроскоп уже в законченном варианте. Хотя, научный прогресс не стоит на месте, и в недалеком будущем, возможно, будут появляться еще более усовершенствованные модели микроскопов.
Видео для детей. Учимся правильно пользоваться микроскопом:
Микроскоп (от греч. mikros - малый и skopeo - рассматриваю) - это оптический прибор, предназначенный для зрительного исследования мелких объектов, невидимых невооруженным глазом. В микробиологии применяют самые разнообразные микроскопы, имеющие различную конструкцию и приспособления, но схожие между собою в своих основных элементах.
Рис. 33. Устройство микроскопа
1 - штатив; 2 - тубус; 3 - головка; 4 - предметный столик; 5 - макровинт; 6 - микровинт;
7 - конденсор; 8 - осветительное устройство; 9 - объектив; 10 - окуляр.
Микроскоп состоит из двух основных частей: механической и оптической (рис. 33). Механическая часть микроскопа включает штатив (1), который состоит из массивного основания и тубусодержателя.
В верхней части тубусодержателя крепится монокулярный или бинокулярный тубус (2) и головка с направляющей типа «ласточкин хвост» (3). На эту направляющую помещают револьвер. Револьвер имеет четыре отверстия с резьбой для ввинчивания объективов и фиксатор для их центрирования. Сферическая часть револьвера вращается на шариках (для быстрой смены объектива) и оснащена шариковым фиксатором.
В средней части тубусодержателя расположен предметный столик (4), который имеет клеммы для фиксирования предметного стекла и боковые винты для продольного и поперечного перемещения. Это значительно облегчает работу с препаратом и позволяет рассматривать объект в различных его точках. В центре предметного столика имеется отверстие для прохождения света. Некоторые исследовательские микроскопы снабжены дополнительными микровинами для микроперемещения объекта.
Тубусодержатель в нижней части несет направляющую с большими ручками (5) грубой фокусировки микроскопа (макрометрический винт или кремальера) и малыми ручками (6) или диском для точной фокусировки микроскопа (микрометрический винт). Вращая кремальеру, производят грубое, видимое глазом, вертикальное перемещение предметного столика или тубуса. С помощью микрометрического винта перемещают предметный столик или тубус вверх - вниз на очень незначительное расстояние, заметное лишь при микроскопировании. Один оборот микрометрического винта дает перемещение на 0,1 мм. Этого достаточно для точной фокусировки объекта. Во избежание поломки микрометрического винта не следует делать им более 1-1,5 оборота.
Оптическая часть микроскопа включает осветительную систему и систему линз.
Осветительная система расположена под предметным столиком и состоит из конденсора (7) и осветительного устройства (8). Конденсор является важнейшей частью микроскопа, от которой зависит успех микробиологических исследований. Он предназначен для собирания рассеянных световых лучей, которые, проходя через линзы конденсора, собираются в фокусе на плоскости рассматриваемого препарата.
Конденсор фиксируется кольцом в оправе, расположенной на кронштейне, и удерживается небольшим болтом. Кроме того, имеется специальный боковой винт, позволяющий передвигать конденсор вверх - вниз на 20 мм для изменения освещенности поля зрения. В нижней части конденсора имеется ирисовая диафрагма. Отверстие диафрагмы регулируется специальным рычагом, что дает возможность изменять яркость освещения объекта. В нижней части конденсора располагается подвижная рамка (оправа), в которую помещают светофильтры из матового или синего стекла. Светофильтры служат для ослабления степени освещенности и улучшения четкости изображения.
Световые лучи направляются в конденсор с помощью зеркала или специального электрического осветительного устройства, которое у различных микроскопов имеет свои конструкционные особенности.
Важнейшей частью микроскопа является также система линз, которая создает увеличенное обратное и мнимое изображение объекта. Она состоит из объектива (9), расположенного в нижней части тубуса и направленного на исследуемый объект, и окуляра (10), помещенного в верхней части тубуса.
Объектив представляет собой металлический цилиндр, в котором закреплены линзы. Главная (фронтальная) линза направлена к препарату. Лишь она обеспечивает необходимое увеличение изображаемого объекта, все остальные коррегируют изображение и называются коррекционными. От фронтальной линзы зависит разрешающая способность микроскопа, т.е. наименьшее расстояние, при котором две близко расположенные точки различают отдельно. В современных оптических микроскопах разрешающая способность объективов составляет 0,2 мкм. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем больше степень ее увеличения.
Однако фронтальная линза вызывает и отрицательные, мешающие исследованию, явления, основными из которых является сферическая абберация и хроматическая абберация.
Сферическая абберация связана с тем, что боковые лучи, падающие на края фронтальной линзы, преломляются сильнее остальных и делают изображение объекта расплывчатым, нечетким. Поэтому каждая точка объекта имеет вид кружочка. Для исправления недостатков фронтальной линзы в объективах - ахроматах имеется система коррекционных линз (от 3-4 до 10-12).
Являясь наиболее простыми, ахроматы страдают хроматической абберацией. Хроматическая абберация обусловлена разложением луча белого света, проходящего через фронтальную линзу, на составные части спектра. Изображение объекта получается как бы окруженное радугой. Наиболее сильно стеклянные линзы преломляют сине-фиолетовые лучи и меньше всего - красные.
Устранение сферической и хроматической абберации наиболее полно достигается при использовании апохроматов. Они состоят из совокупности линз, имеющих различную кривизну и изготовленных из разных сортов стекла. Это создает условия обеспечения четкости изображения и для более правильной передачи окраски цветных объектов.
В первое время использовались ахроматы, которые позволяли устранять хроматическую абберацию в отношении двух наиболее ярких цветов спектра. Поэтому изображение объекта было лишено окраски. В дальнейшем были получены особые сорта стекла, линзы из которых устраняли не только окрашивание объекта., но и давали четкое изображение от лучей разного цвета. Такие объективы получили название апохроматы.
Панахроматы имеют еще более сложную конструкцию и позволяют создавать более четкие контуры объектов во всем поле зрения
Для выбора объективов на их корпусе гравируют обозначения: ахр. - ахромат, апо. - апохромат; пан. - панхромат
Различают объективы сухие и иммерсионные. При использовании сухого объектива между его фронтальной линзой и рассматриваемым объектом находится прослойка воздуха. Световые лучи из воздуха проходят через стекло препарата, затем снова через воздушную прослойку, в результате чего преломляются и рассеиваются на границе разнородных сред. После таких переходов через разнородные среды только часть световых лучей проникает в объектив. Чтобы уловить максимальное количество световых лучей, фронтальная линза объективов должна иметь сравнительно большой диаметр, большое фокусное расстояние и малую кривизну. Поэтому сухие объективы имеют небольшую степень увеличения (8 х, 10 х, 20 х, 40 х).
Для достижения большего увеличения необходимо создать однородную оптическую среду между фронтальной линзой объектива и препаратом. Это становится возможным при погружении объектива в каплю кедрового масла, которую наносят на препарат. Кедровое масло обладает коэффициентом преломления n = 1,515, близким к коэффициенту преломления стекла препарата (п = 1,52). Поэтому световые лучи, проходящие через иммерсионное масло, не рассеиваются и, не меняя своего направления, попадают в объектив, обеспечивая четкую видимость исследуемого объекта. При отсутствии кедрового масла используют заменители: персиковое масло (n = 1,49); касторовое масло (1,48-1,49); гвоздичное масло (1,53); иммерсиол, в состав которого входят персиковое масло (50 г), канифоль{10 г), нафталин (10 г), салол (1 г); смесь равных объемов касторового (n = 1,47) и укропного (n - 1,52) масел.
Объективы масляной иммерсии имеют маркировку «МИ» черную полосу на цилиндре и утопающую фронтальную линзу, что предохраняет ее от повреждения в случае неосторожного соприкосновения объектива с препаратом. Степень увеличения изображения у масляных иммерсионных объективов может быть 80 х,90 х,95 х,100 х и120 х.
Объективы водной иммерсии имеют степень увеличения изображения 40Х. Они маркируются буквами «ВИ» и белой полосой на цилиндре. Такие объективы очень чувствительны к изменению толщины покровного стекла, так как коэффициент преломления воды отличается от коэффициента преломления стекла. Наилучшее качество изображения наблюдается при использовании покровных стекол толщиной 0,17 мм.
Большинство микроскопов снабжено тремя типами объективов (10 х, 20 х, 40 х и 90 х), обеспечивающих соответственно малое, среднее и большое увеличение. Наименьшая кратность увеличения объектива - 8 х. При длительной обработке объектива ацетоном или бензином с целью удаления иммерсионного масла, клей, соединяющий линзы, разрушается. Это приводит в негодность оптическую систему объектива.
Окуляр находится в верхней части тубуса и увеличивает изображение, данное объективом. Он состоит из двух плоско-выгнутых линз: верхней линзы (глазной) и нижней, обращенной к объекту, собирающей линзы. Глаз исследователя, как бы продолжая оптическую систему микроскопа, преломляет лучи, вышедшие из окуляра и строит увеличенное изображение объекта на сетчатке.
Обе линзы заключены в металлическую оправу. На оправе окуляров гравируется цифра, показывающая, во сколько раз окуляр повышает увеличение объектива. В монокулярном микроскопе используют один объектив, а в бинокулярном микроскопе - два. Соответственно, изображение объекта получается плоским или стереоскопическим. Бинокулярный тубус можно настроить на любые межзрачковые расстояния в диапазоне от 55 до 75 см.
Кратность увеличения окуляра обозначена на металлической оправе глазной линзы (7 х, 10 х или 15 х). Общее увеличение микроскопа равно произведению коэффициента увеличения объектива и коэффициента увеличения окуляра. Таким образом, наименьшее увеличение биологических микроскопов – 56 раз (8 - увеличение объектива, умноженное на 7 – увеличение окуляра), а наибольшее - 1800 (120х15).
Однако увеличенное изображение объекта может четким и нечетким. Четкость изображения определяется разрешающей способностью микроскопа (полезным увеличением) т.е. минимальным расстоянием между двумя точками, когда они еще не сливаются в одну. Чем больше разрешающая способность микроскопа, тем меньший объект можно увидеть.
Показатель разрешающей способности микроскопа зависит от длины волны используемого света и суммы числовых апертур объектива и конденсора:
где α - минимальное расстояние между двумя точками;
А 1 - числовая апертура объектива;
А 2 - числовая апертура конденсора;
λ - длина волны используемого света.
Числовые апертуры объектива и конденсора указаны на их корпусе. Повысить разрешающую способность микроскопа можно, используя ультрафиолетовое облучение. Однако ультрафиолетовые микроскопы очень дорогие, что затрудняет их использование. Чаще всего для повышения разрешающей способности микроскопа применяют иммерсионную систему.
Прочитайте:
|
К практическому занятию по разделу «Биология клетки»
Для студентов 1 курса специальности «Медико-профилактическое дело»
ТЕМА. Микроскоп и правила работы с ним
ЦЕЛЬ. На основании знания устройства светового микроскопа, освоить технику микроскопирования и приготовления временных микропрепаратов.
ПЕРЧЕНЬ ЗНАНИЙ И ПРАКТИЧЕСКИХ НАВЫКОВ
1. Знать основные части микроскопа, их назначение и устройство.
2. Знать правила подготовки микроскопа к работе.
3. Уметь работать с микроскопом при малом и большом увеличении.
4. Уметь готовить временные микропрепараты.
5. Уметь правильно вести протокол практической работы.
ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ ТЕМЫ
1. Основные виды микроскопии.
2. Основные части светового микроскопа их назначение и устройство.
3. Элементы механической части микроскопа.
4. Осветительная часть микроскопа. Каким образом можно увеличить интенсивность освещенности объекта?
5. Оптическая часть микроскопа. Как определить увеличение объекта?
6. Правила подготовки микроскопа к работе.
7. Правила работы с микроскопом.
8. Техника приготовления временного микропрепарата.
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ ТЕМЫ
Микроскоп используется для изучения мелких объектов. В практической работе обычно пользуются микроскопом МБР-1 (микроскоп биологический рабочий), или МБИ-1 (микроскоп биологический исследовательский), «Биолам» и МБС-1 (стереоскопический микроскоп).
ВИДЫ МИКРОСКОПИИ: световая (лупа, люминесцентный, обычные световый микроскопы – МБИ–1, МБР-1, «Биолам» и др.) и электронная (просвечивающий и сканирующий микроскоп).
СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ – основной метод изучения биологических объектов, поэтому освоение техникой микроскопирования, приготовления временных микропрепаратов необходимо для практической работы врача. Разрешающая способность светового микроскопа ограничена длиной световых волн. Современные световые микроскопы дают увеличение до 1500. Очень важно, что в световом микроскопе можно изучать не только фиксированные, но и живые объекты. Поскольку структуры большинства живых клеток недостаточно контрастны (они прозрачны), разработаны специальные методы световой микроскопии, позволяющие повысить контрастность изображения объекта. К таким методам относятся фазово-контрастная микроскопия, микроскопия в темном поле и др.
ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ – использует не свет, а поток электронов, проходящий через электромагнитные поля. Длина волны электронов зависит от напряжения, подаваемого для генерации электронного пучка, практически можно получить разрешение приблизительно в 0,5 нм, т.е. примерно в 500 раз больше, чем в световом микроскопе. Электронный микроскоп позволил не только изучить строение ранее известных клеточных структур, но и выявить новые органеллы. Так, было обнаружено, что основу строения многих клеточных органоидов составляет элементарная клеточная мембрана.
Основные части микроскопа: механическая, оптическая и осветительная.
Механическая часть. К механической части относятся штатив, предметный столик, тубус, револьвер, макро- и микрометрические винты. Штатив состоит из основания, придающего микроскопу устойчивость. От середины основания вверх отходит тубусодержатель, к нему прикреплен тубус, расположенный наклонно. На штативе укреплен предметный столик. На него помещают микропрепарат. На предметном столике имеются два зажима (клеммы) для фиксации препарата. Через отверстие в предметном столике обеспечивается освещение объекта.
На боковых поверхностях штатива имеются два винта, с помощью которых можно передвинуть тубус. Макрометрический винт служит для грубой настройки на фокус (на четкое изображение объекта при малом увеличении микроскопа). Микрометрический винт используется для тонкой настройки на фокус.
Оптическая часть. Оптическая часть микроскопа представлена окулярами и объективами. Окуляр (лат. осиllus – глаз) находится вверхней части тубуса и обращен к глазу. Окуляр представляет собой систему линз. Окуляры могут давать различное увеличение: в 7 (×7), 10 (×10), 15 (×15) раз. На противоположной стороне тубуса находится вращающийся диск – револьверная пластинка. В ее гнездах закреплены объективы. Каждый объектив представлен несколькими линзами, так же как окуляр, позволяет получить определенное увеличение: ×8, ×40, ×90.