Патологични промени в съдовете от компенсаторен тип. атеросклероза
Диференциален ефект на екстракти от Pistacia vera върху експериментална атеросклероза при животински модел на заек: експериментално изследване
Източник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2917426/
Диетите, обогатени с липиди, и оксидативният стрес са рискови фактори за развитието на атеросклероза. Ефектите на метанолните (ME) и циклохексановите (CHE) екстракти от ядката Pistacia vera, често включвана в средиземноморската диета, са изследвани в заешки модел на атеросклероза.
Двадесет и четири новозеландски бели зайци бяха хранени с атерогенна диета (контролна група), допълнена с ME (ME група) или CHE (CHE група) в продължение на 3 месеца. Преди това бяха разработени GC-MS и UHPLC LC-DAD-ESI(-)-HRMS/MS за изследване на химичните профили на екстрактите. Кръвни проби на изходни и месечни нива на липиден профил, липидна пероксидация и чернодробна функция. Аортата, миокардът и черният дроб са изследвани хистологично след 3 месеца.
Групите ME и CHE имат значително по-високи нива на HDL холестерол и не значително по-ниски средни нива на LDL холестерол като % от изходното ниво в сравнение с контролната група. Триацилглицеролът е значително по-висок в CHE групата спрямо контролата. Стойностите на MDA са значително по-ниски в ME групата в сравнение с контролите и CHE. ALT и AST са значително по-високи в CHE спрямо контролната група. γ-GT е по-нисък в ME групата в сравнение с контролите. Дебелината на аортната интима е значително по-малка в групите ME и CHE в сравнение с контролите; Атеросклеротичните лезии на ME групата са значително по-малко обширни в сравнение с контролните и CHE групите. Само групата CHE има значителна мастна чернодробна инфилтрация.
По време на краткосрочно приложение, заедно с атерогенна диета, и двата екстракта от P. vera са били полезни за HDL-, LDL-холестерола и дебелината на аортната интима. ME допълнително показва антиоксидантен ефект и значително намаляване на повърхностното увреждане на аортата. Тези резултати показват, че включването на P. vera в диетата, особено на неговия ME, е потенциално полезно при лечението на атеросклероза.
Сърдечно-съдовите заболявания са водещата причина за смърт в индустриализираните части на света, в основата на които е атеросклерозата. Развитието и прогресирането на атеросклеротичните лезии е проучено широко. Проведени са много клинични проучвания върху диетичните протоколи, като например проучването на седемте държави за средиземноморската диета, която включва зехтин. Други клинични проучвания включват фармацевтични и хирургични интервенции самостоятелно или в комбинация. Научните доказателства за патогенезата и лечението на атеросклерозата през миналия век до голяма степен идват от изследователски протоколи върху животински модели.
Заекът, един от най-важните модели за изучаване на атеросклерозата, реагира бързо на стимулиране на атеросклеротичните лезии чрез диета с високо съдържание на холестерол. Някои диетични проучвания са използвали този модел, включително прилагането на зехтин или рибено масло и различни екстракти от семена или масла, извлечени от слънчогледови семки, фъстъци, ленени семена или лешници. Хранителна ядка, консумирана самостоятелно или като съставка в традиционни рецепти, е шамфъстъкът от дървото Pistacia vera, което принадлежи към семейство Anacardiaceae и е разпространено в централна и югоизточна Гърция, както и в други средиземноморски и близкоизточни страни. Доколкото ни е известно, са публикувани само in vitro проучвания относно неговите биологично активни ефекти върху развитието на атеросклероза. Затова се опитахме да изследваме ефектите от прилагането на P. vera циклохексан (CHE) и метанолов екстракт (ME) в експериментален заешки модел на атеросклероза върху серумната биохимия, както и върху аортното, сърдечното и чернодробното увреждане.
Таблица 1 показва описателната статистика на измерените параметри на 3-те групи. Таблица 2 показва средните процентни промени спрямо изходното ниво в телесната биомаса, липидния профил и антиоксидантния статус, както и общите статистически стойности. Таблица 3 показва средните процентни промени спрямо изходното ниво в активността на чернодробните ензими и общите статистически стойности. Таблица 4 показва морфометричния анализ на аортата на заек.
Описателна статистика: средна стойност ± стандартно отклонение на телесното тегло и биохимичните параметри
Средни стойности на телесно тегло, липиден профил и оксидативен стрес по време на периода на наблюдение в три групи: контрол (атерогенна диета), ME (атерогенна диета плюс ME), CHE (атерогенна диета плюс CHE).
Всички променливи са представени като средна стойност ± SD
Процентна промяна в телесното тегло, липидния профил и оксидативния стрес в заешки серум
Среден процент промени от изходното телесно тегло, липидния профил и стойностите на оксидативния стрес по време на периода на наблюдение в три групи: контрол (атерогенна диета), ME (атерогенна диета плюс ME), CHE (атерогенна диета плюс CHE).
Съществена разлика при p
b Значителна разлика при p
Процентна промяна в активността на чернодробните ензими в заешки серум
Средната процентна активност на чернодробните ензими се променя спрямо изходното ниво по време на периода на наблюдение в трите групи. Контролна група: атерогенна диета, ME група: атерогенна диета плюс ME, CHE група: атерогенна диета плюс CHE
Съществена разлика при p
b Значителна разлика при p
Общ знак: Цялостно значение, NS: Незначително
Морфометричен анализ на аортите на зайци
Резултатите са изразени като медиана ± SD.
Контролна група: атерогенна диета, ME група: атерогенна диета плюс ME, CHE група: атерогенна диета плюс CHE
Съществена разлика при p
b Значителна разлика при p
Крайната средна % промяна от изходното ниво в контролните, ME и CHE групите не беше статистически значима (Таблица 2), въпреки че имаше умерено увеличение на абсолютните средни стойности (Таблица 1).
Нивата на плазмените липиди и в трите групи са сходни в началото. Средната % промяна спрямо изходното ниво по време на периода на проследяване, описан по-долу, е показана в таблица 2.
Средната % промяна от изходното ниво до 1 месец за групите ME и CHE е статистически значимо по-висока в сравнение с контролната група (p = 0,01 и 0,05, съответно).
Средната промяна на CHE групата беше статистически значимо по-висока от контролната и ME групите през месеци 1 и 2, докато ME и CHE групите имаха статистически значими по-високи стойности от контролната група през месец 2 (p = 0,001 и p
Средната промяна в групата на CHE е статистически значимо по-ниска в сравнение с контролната група на месец 1 и 2 (p
Средната % промяна на ME групата е статистически значимо по-висока в сравнение с контролната група на месец 1 и 2 (p
Средната промяна в групата на CHE е статистически значимо по-висока в сравнение с групата на ME на 2 и 3 месеца (p = 0,032 и 0,012, съответно). Нещо повече, средната промяна в ME групата е статистически значимо различна в сравнение с контролната група на 1 и 3 месеца (p
Средната % промяна на ME групата е статистически значимо по-висока в сравнение с контролната група на месец 2 (p = 0,05), докато средната промяна на CHE групата в сравнение с контролната група е значително по-висока по време на проучването (p
Средната % промяна в плазмените стойности на всички групи не показва статистически значимо увеличение през целия експериментален период, като CHE групата има по-високи стойности само през месец 3 (p = 0,007).
Средната промяна в ME групата е статистически значимо по-ниска в сравнение с контролната и CHE групите през третия месец от експеримента (p
Макроскопски образци от аорта от контролната и CHE групите показват обширни атеросклеротични плаки, покриващи почти цялата горна част на изрязаната аорта (Таблица 4 и Фигури 1A и 1E). Резултатите от ME групата показват по-малко екстензивни лезии в сравнение с група A, а също и в сравнение с групата CHE (Таблица 4 и Фигура 1C).
Макро- и микроскопични изображения на представители на аортата при зайци от три групи. 1A, 1C, 1E са представителни изображения от груби проби от аорта, принадлежащи съответно към групите Control, ME и CHE. Стрелките показват образуването на атеросклеротични плаки. Както е показано, контролната група показва обширни атеросклеротични плаки, покриващи почти цялата горна част на изрязаната аорта. Групите ME и CHE показват по-малко обширни лезии в сравнение с контролната група, а между двете групи групата ME има най-малко образуване на лезии. 1B, 1D, 1F - микрографии съответно от 1A, 1C, 1E (еозин - хематоксилин, оригинално увеличение × 100). Фигура 1B (контролна група) показва уязвима плака с много пенести клетки, възпаление и забележително удебеляване на интимата. Фигура 1D (група ME) показва лезията, описана по-горе, но по-малко екстензивна (дебелината на интима/медия е по-малка, отколкото при 1B. Фигура 1F (група CHE) показва ендотел на аортата с данни за удебеляване и много пенести клетки, но съотношението интима/медия е по-малко отколкото в 1 B. Стрелките показват ширината на ендотела.
Хистопатологичните находки на групите Control и CHE показват уязвими плаки с много пенести клетки, възпаление и забележително удебеляване на интимата (фигури 1B и 1F). ME групата показа лезиите, описани по-горе, но по-малко обширни (фиг. 1D).
Сърдечното хистологично изследване не разкрива значителни промени между групите.
Хистологичното изследване на черния дроб не разкрива значителни промени между груповата контрола и ME. Групата CHE показва статистически значима мастна инфилтрация в сравнение с контролната група.
Негенетичният хиперлипидемичен заек е животински модел, широко използван в изследванията на атеросклерозата. Различни нива на диетичен холестерол (0,2-1,3%) са използвани за експериментално създаване на експеримента и едновременното прилагане на други потенциално полезни вещества е изследвано за периоди от 8 до 14 седмици.
Растенията от шам-фъстък са дървета или храсти, произхождащи от Гърция и други средиземноморски и близкоизточни страни. Сред тях е доказано, че P. lentiscus има антиоксидантни, антибактериални, предпазващи черния дроб и цитостатични ефекти и предотвратява окисляването на LDL холестерола in vitro. Доказано е, че P. terebinthus има благоприятен ефект върху маточни брадавици и кожни меланоми. Малко изследвания са направени върху P. vera. Съобщава се, че има растителни противогъбични ефекти. P. vera ME съдържа малки количества катехин, полифенолен флавоноид, който показва потенциално по-висока антиоксидантна активност от аскорбиновата киселина и α-токоферол в in vitro проучвания. Катехинът и неговите продукти също са цитирани като фактори за намаляване на риска от сърдечно-съдови заболявания чрез понижаване на серумния холестерол, намаляване на агрегацията на тромбоцитите и понижаване на кръвното налягане.
В настоящото проучване ние изследвахме ефекта от съвместното приложение на P. vera върху прогресирането на индуцирана от холестерол атеросклероза в животински модел на заек за период от 12 седмици. Избрахме отделно да манипулираме ME или CHE P. vera в различни групи животни, за да можем да идентифицираме кои компоненти биха били отговорни за потенциално различни резултати. GC-MS анализът на CHE разкрива, че основните му съединения са b-ситостерол, сквален, стигмастерол, олеинова и палмитинова киселини. Клиничните изпитвания вече показват защитните ефекти на такива растителни стероли срещу развитието на коронарна болест на сърцето. Освен това, ME анализ с помощта на LC-HRMS/MS техники разкри наличието на галов метилов естер, протокатехинова киселина и галова киселина. Доказано е, че галовата киселина има антиатерогенна активност.
Резултатите от настоящото проучване показват благоприятен ефект от едновременното приложение на P. vera ME и CHE в обогатена с холестерол диета върху промените в HDL-C. ME също показва по-малка промяна в MDA спрямо изходното ниво, като по този начин проявява лек антиоксидантен ефект. Благоприятният ефект на LDL-C не е статистически значим. Други изследвани биохимични параметри (TC, TAG и чернодробни ензими) не показват благоприятен ефект на ME, когато се анализират с помощта на средни стойности. Анализът на нашите данни, използвайки средни абсолютни стойности, показа статистически значим защитен ефект на ME върху горните параметри (Таблица 1). Въпреки това, поради липсата на нормално разпределение на стойностите, използването на непараметричен анализ (тестове на Kruskal-Wallis и Mann-Whitney) се счита за необходимо.
Няколко растителни вещества имат благоприятен ефект върху химията на кръвта при зайци, хранени с холестерол. Полифенолът в зехтина, известен като хидрокситирозол, повишава нивата на HDL-C при атерогенни зайци, хранени с диета. Сусамовото брашно има благоприятен ефект върху нивата на общия холестерол и триглицеридите при зайци, хранени с холестерол. Освен това, сециоларицирезин диглюкозид (SDG), растителен лигнин, изолиран от ленено семе, когато се прилага на зайци в продължение на 8 седмици, води до намаляване на LDL-C и повишаване на HDL-C и антиоксидантна активност, подобно на нашето проучване. Освен това, друго проучване при зайци, използващо етанолов екстракт от lysimachioides Hypericum Boiss var lysimachioides (Guttifera), показва статистически значимо понижение на нивата на MDA, както и повишаване на нивата на HDL-C, което е в съответствие с нашето проучване.
Нашите резултати показват, че лечението с двата екстракта от P. vera причинява умерено повишаване на стойностите на TC, въпреки че това не се различава значително от контролната група през втория и третия месец от приложението.
Средните стойности на HDL-C в контролната група бяха по-ниски в края на експеримента, докато съвместното приложение на екстракти от P. vera (групи ME и CHE) значително инхибира това понижение. Като се има предвид, че ниските нива на HDL-C са свързани с по-висок риск от сърдечно-съдови заболявания, потвърдено е, че повишаването на нивата на HDL-C ще доведе до защитен ефект срещу атеросклероза след дългосрочно приложение на екстракти от P. vera.
Нашите резултати показват значителни разлики в плазмените нива на MDA между ME и контролните групи. Това предполага, че благоприятните ефекти на P. vera ME върху някои липиди и аортата може да се дължат на лек антиоксидантен ефект.
В нашето проучване нивата на чернодробните ензими се повишават, достигайки максимални нива през третия месец във всички групи. По-конкретно, промените в ALT и AST са увеличени в групите ME и CHE в сравнение с контролите. Както клиничните, така и експерименталните проучвания показват, че повишените ALT и AST могат да предсказват развитието на атеросклероза. В допълнение, промените в γGT на ME групата са статистически значимо по-ниски през третия месец в сравнение с контролната група. Това показва положителен ефект на P. vera ME и CHE върху функцията на жлъчната система на атеросклеротични животни. В проучване на Hakimoglu et al. чернодробната хидропия и липидна дегенерация са намалени в етаноловия екстракт от Lysimachoides Hypericum в сравнение със зайци, хранени само с обогатена с холестерол диета. Тази констатация е подобна на нашата, където хистологията на черния дроб, която дадох на зайците, беше по-малко засегната от групата с холестерол (контролна група), въпреки че нямаше статистически значима разлика. По-специално, зайците от контролната група са страдали от увреждане на черния дроб, характеризиращо се със стеатоза и фиброза, което е още по-очевидно в групата CHE.
Образуването на макроскопска плака в ME групата е по-малко в сравнение с контролната и CHE групите. Подобно на нашето проучване, други изследователи отбелязват, че въпреки повишаването на нивата на серумния холестерол след прилагане на екстракта, резултатите от патологията на проби от аортата могат да покажат подобрение на атеросклерозата. Агилера и др. установяват, че необработеният зехтин и рибеното масло намаляват развитието на атеросклеротични плаки. Освен това е доказано, че ореховото масло намалява атеросклеротичните лезии в аортата на зайци, хранени с холестерол. Освен това ефектът от прилагането на зелен чай, съдържащ съединения, извлечени от епикатехин, на зайци има благоприятен ефект върху артериалните атеросклеротични плаки. Това е в съответствие с нашите резултати, показващи значителен положителен ефект на P. vera ME върху развитието на аортна атеросклероза. По-специално, ME групата демонстрира значително инхибиране на атеросклеротичните плаки както по дебелина, така и по ширина в лумена на аортата. Това може да се дължи на основните компоненти на ME като галова киселина и катехин, които може да са отговорни за този процес на инхибиране, както вече беше посочено. От друга страна, CHE групата показва по-леко инхибиране на атеросклерозата спрямо дебелината на плаката, което може да се обясни с наличието на b-ситостерол, сквален, стигмастерол, олеинова и палмитинова киселини, както е показано по подобен начин.
Групата CHE показва най-ниска антиоксидантна активност. Този ефект може да се дължи на обширните, но по-малко сложни атеросклеротични лезии, наблюдавани в пробите от аортата на CHE групата в сравнение с тези на контролната и ME групите. Въпреки това, ME групата показа много по-силна антиоксидантна активност. Статистически значимият наблюдаван антиоксидантен ефект на ME, очевиден в анализа на MDA, също значително намалява отлагането на аортна плака. От друга страна, CHE не повлиява степента на атеросклеротичните лезии. Тези открития могат да бъдат приписани на компонентите на P. vera ME, които проявяват антиоксидантна активност.
В заключение, когато се прилагат краткосрочно заедно с атерогенна диета, и двата екстракта от P. vera са полезни за HDL-, LDL-холестерола и дебелината на аортната интима. ME допълнително показва антиоксидантен ефект и значително намаляване на повърхностното увреждане на аортата. Тези резултати показват, че включването в диетата на P. vera, особено на неговия ME, може потенциално да бъде от полза при лечението на атеросклероза. P. vera ME и CHE се използват in vivo за първи път, доколкото ни е известно, в изследването на атеросклерозата и показват обещаващи ефекти върху процеса на инхибиране. Необходими са повече изследвания, преди P. vera да може да бъде клинично препоръчан за включване в диетата за лечение на атеросклероза.
Двадесет и четири нормални новозеландски бели зайци (2,7 ± 0,2 kg), закупени от гръцки сертифициран търговски развъдник, бяха разпределени на случаен принцип в три равни групи (контрола, ME и CHE) и настанени отделно в клетки от неръждаема стомана със свободен достъп до храна и вода от чешмата. Условията за настаняване на животните са 20 ± 2 °C, 60 ± 5% относителна влажност и 12:12 h цикъл светлина:тъмнина. Животните са обработени в съответствие със стандартите, установени от Европейската директива 86/609/EEC. Местните ветеринарни власти и комисията по етика на животните одобриха (лиценз № K/950) проучването. Контролната група получава стандартна балансирана диета за зайци (химичен състав: общо мастни киселини 2,5%, целулоза - 18,5%, общ протеин - 16,5%, вода - 13%, пепел - 11%, калций - 1,4%, лизин - 0,6%, метионин-цистин - 0,55%, фосфор 0,55%, натрий 0,25%), обогатен с 1% холестерол (Dolder, Швейцария) (атерогенна диета), ME групата получи атерогенна диета плюс ME (1% тегловни) и атерогенната диета група CHE плюс CHE (5% от теглото) Диетите бяха прясно приготвени на всеки три дни преди консумация.
Количество от 15 kg прахообразни ядки от шам-фъстък, събрани от гръцкия остров Егина, се екстрахират при стайна температура, като първо се обезмасляват с циклохексан, като се получават 7,5 kg остатък от зелено масло след изпаряване на разтворителя. CHE беше осапунен чрез конвенционална процедура, водеща до естерифицирани мастни киселини. Метиловите естери на мастни киселини и неутаеният остатък бяха анализирани чрез GC и GC/MS, като се получиха b-ситостерол, сквален, стигмастерол, олеинова киселина и палмитинова киселина като основни съединения (вижте Допълнителен файл 1)
,
След екстрахиране на прахообразните ядки от шам фъстък с циклохексан, растителният материал се екстрахира допълнително с дихлорометан, за да се получат 1,5 kg зелен маслен екстракт и след това с метанол, за да се получи остатък от 500 g след изпаряване на разтворителя. Количество от 400 g остатък се подлага на XAD-4 смола за отстраняване на захарта, за да се получат ME, обогатени с фенолни съединения. Методът LC-DAD-ESI(-)-HRMS/MS е разработен за характеризиране на химическия профил на обогатения екстракт. Анализът беше извършен с помощта на UHPLC устройство, свързано с високопроизводителен хибриден спектрометър LTQ-Orbitrap Discovery. Фенолни съединения, метил халид (1), галова киселина (2), протокатехинова киселина (3), катехин (4) и епикатехин (5) бяха използвани като аналитични стандарти и тяхната идентификация беше направена чрез сравнение на времето на задържане, UV-Vis и високопрецизни масспектри на пикове в пробата с проби от стандартни съединения.
Придружаващият допълнителен файл 1 предоставя подробен анализ на компонентите на екстрактите.
Всички животни са гладували 12 часа преди вземането на кръв. Те бяха леко седирани (кетамин хидрохлорид 12 mg/kg, ксилазин 2,5 mg/kg телесно тегло, im) за процедурата, за да се избегне излагането на стрес. Кръвни проби от ушните артерии на животните бяха поставени в епруветки на Васерман, съдържащи антикоагулант през месеците 0, 1, 2 и 3 от експерименталната процедура. Плазмата се отделя чрез центрофугиране при 3500 rpm за 15 минути. Плазмен общ холестерол (ТС), липопротеинов холестерол с висока плътност (HDL-C), липопротеинов холестерол с ниска плътност (LDL-C), концентрации на триацилглицерол (TAG), серумна аланин аминотрансфераза (ALT), аспартат аминотрансфераза (AST) и гама Активността на серумната глутамилтрансфераза (γGT) се измерва с търговски комплекти за ензимни тестове съгласно инструкциите на производителя (Biomerieux, Lyon, France), като се използва автоматичен анализатор (тип 7170A, Hitachi, Tokyo, Japan). MDA се изчислява с помощта на ръчния метод за реактивни вещества с тиобарбитурова киселина (TBARS), както е описано от Yagi. В края на експерименталното изследване и след вземане на последната кръвна проба под седация, зайците бяха евтаназирани с натриев тиопентал (30 mg/kg i.v.).
Аортата беше отстранена от аортната артерия в илиачната бифуркация. Тъканта, прилепнала към адвентицията, беше отстранена и аортата беше разрязана надлъжно по средата на вентралната стена. След това аортата се фиксира в 10% фосфатно буфериран формалин. Луминалната повърхност на всеки аортен образец се изобразява и изображението се съхранява електронно. Срезове от всички проби бяха получени от три стандартни места (непосредствено дистално от клона на лявата субклавиална артерия, в седмата интеркостална артерия и непосредствено зад CD). Тези проби бяха вградени в парафинови блокове и оцветени с хематоксилин-еозин. Хистопатологичните атеросклеротични лезии на аортата бяха класифицирани според класификацията на Stary, а дебелината и повърхностната площ на атеросклеротичните лезии в стената на аортата бяха полуколичествени с помощта на автоматизирана система за анализ на изображения. Накратко, оценяваните параметри са удебеляване на интимата, натрупване на пенести клетки, мононуклеарни инфилтрати, липидно ядро и образуване на фиброзна капачка. Цифрови изображения бяха получени от слайдовете с помощта на фотомикроскоп (Nikon Eclipse 80i, Nikon Corp, Токио, Япония), оборудван с цифрова камера (Nikon DS - 2 MW). Всички изображения бяха прехвърлени на компютър с подходящ софтуер (Image ProPlus v. 5.1, Media Cybernetics, MD, USA).
Сърцето и черният дроб се претеглят и фиксират в 10% фосфатно буфериран формалин. Бяха взети стандартни срезове, поставени в хематоксилин-еозин парафинови блокове и миокардните проби бяха допълнително оцветени с трихромно оцветяване на Masson.
Увреждането на миокарда се оценява от 0 до 3 за интерстициален оток, фиброза и инфилтрати на пенести клетки. Чернодробните лезии са класифицирани в четири класа, както е описано по-горе, по отношение на архитектурни промени, мастна инфилтрация и фиброза.
Данните бяха изразени като средна стойност ± стандартно отклонение (SD) и средни стойности поради нарушение на нормалността. За анализ на нормалността на параметрите е използван тестът на Колмогоров-Смирнов.
За да се покаже тенденцията през първите 3 месеца от лечението, бяха изчислени средните процентни промени след 1, 2 и 3 месеца на променливите. Сравненията на процентната промяна от изходното ниво в променливите по време на периода на проследяване и хистопатологичните променливи между трите групи бяха анализирани с помощта на теста на Kruskal-Wallis и теста на Mann-Whitney (сравнения по двойки).
Всички тестове бяха двустранни, статистическата значимост беше определена на p
P.vera: Pistacia vera; ME: Метанолов екстракт от Pistacia vera; CHE: Екстракт от циклохексан от Pistacia vera; GC: газова хроматография; MS: масспектрометрия; UHPLC: ултра-високо ефективна течна хроматография; LC: течна хроматография; DAD: детектор с диодна матрица; ESI: йонизация с електронен спрей; HRMS: масова спектрометрия с висока разделителна способност; TC: общ холестерол; LDL-C: липопротеинов холестерол с ниска плътност; HDL-C: липопротеинов холестерол с висока плътност; ЕТИКЕТ: триацилглицерол: MDA: нисък алдехид; ALT: аланин аминотрансфераза; AST: аспартат аминотрансфераза; y-GT: гама-глутамилтрансфераза; TBARS: реактивни вещества с тиобарбитурова киселина; SD: стандартно отклонение; SPSS: Статистически пакет за социалните науки; SDG: сециоларицирзинол диглюкозид.
CM проведе експерименталното проучване, включително общ преглед на животните, подготовка на диети, вземане на кръвни проби, евтаназия и изготвяне на ръкописа. KG и MH подготвиха екстракта от циклохексан-метанол и съответните диети и ги анализираха. GA и EP извършиха и координираха всички патологични стъпки върху тъканни проби. TK и DI участваха в отстраняването на тъканите и подготовката на ръкописа. AP и AC допринесоха за дизайна на проучването. Министър-председателят реализира проект за производство на екстракти от Pistaci. NT допринесе за изготвянето на диети и ръкописа. LAS и ID замислиха дизайна на изследването, координираха експериментите и изготвиха ръкописа. Всички автори прочетоха и одобриха окончателния ръкопис.
Методи за получаване на циклохексанови и метанолови екстракти. Подробности за методологията за приготвяне на циклохексанови и метанолови екстракти, включително 2 фигури.
Щракнете тук за файл
Д-р К. Марино е благодарен на гръцкото Министерство на развитието на селските райони и храните за подкрепата и образователния отпуск и на професор Д. Н. Переа за ценните съвети и подкрепа в проучването. Д-р Дантас признава специалната сметка за безвъзмездни средства за научни изследвания (№ 70/4/2591) на Националния и Каподистрийския университет в Атина за финансова подкрепа. Авторите благодарят на биостатистика д-р A. Galanos за експертния статистически анализ на изследването и признават експертната помощ на K. Perrea, K. Papadaki, E. Doucy, G. Pantelis, P. Rapos и Z. Merthyri по време на експериментите.
Нека разгледаме специално проблема с моделирането на атеросклерозата. Експерименталният модел на последния е показателен в много отношения.
Заекът, тревопасно животно, се въвежда в стомашно-чревния тракт за дълъг период от време с огромно количество холестерол, т.е. хранителен продукт, който всъщност е чужд за него. Но през цялата човешка история храните, съдържащи холестерол, са били нормални диетични съставки. Огромното значение на холестерола за разнообразните функции на тялото се отразява и в способността на последния да синтезира холестерол независимо от диетата, като мястото на синтеза е по-специално артериалната система, т.е. стените на артериите.
Чужд хранителен продукт за зайци- холестерол - наводнява кръвта и като чуждо химично тяло, което няма адекватни ензимни системи в тялото на заека, които разграждат холестерола, или органи, способни да отделят холестерол във външната среда, се отлага в изобилие в ретикулоендотелната система и в артериалната система, преминавайки нейната ендотелна бариера. Това е общата съдба на високомолекулните съединения (като метилцелулоза, пектин, поливинилалкохол), които не се разграждат от тялото и не се освобождават от него.
Следователно, от обща теоретична гледна точка, която определя същността на всеки модел, феноменът, получен при зайци, има само външна прилика с човешката артериосклероза. Това сходство е морфологично, химично, но не етиологично (екологично) и не е патогенетично.
Заешкият модел на атеросклероза е резултат преди всичко от неадекватно хранене. Следователно не може да се разглежда като модел на човешка атеросклероза и като модел на метаболитни нарушения на метаболизма на холестерола, дори само защото отлаганията на чужди вещества не могат да бъдат документация за метаболитни нарушения на същите вещества, точно както, например, отлаганията на олово в костите не документирайте олово нарушения обмен.
И последното нещо:при човешката атеросклероза въпросът за нарушенията на метаболизма на холестерола се решава доста негативно.
Изложеното не изключва голямото когнитивно значение на същия модел.
Последният учи, че съдовите бариери- много условна концепция и че големи молекулни съединения могат свободно да преминават през тях дори извън специална дизория, т.е. такива форми на пропускливост на съдовите стени, които се появяват по време на оток и възпаление. Моделът също така подчертава значението на артериалната система за улавяне на всички циркулиращи химични съединения, които обикновено са чужди за тялото или които са станали такива в процеса, например, на денатурация на протеинови тела (амилоидоза, хиалиноза).
Методологически важен аспект на същия модел е, че той разкрива опасността от едностранчиви преценки, в този случай базирани на чисто морфологична документация.
„Проблемът с причинно-следствената връзка в медицината“, И. В. Давидовски
Историята на експерименталното моделиране на болестта е поучителна в много отношения, предимно за решаване на фундаментални въпроси, свързани с етиологията. Той е поучителен и по отношение на общата методика на биологичния експеримент, неговите теоретични основи и практически изводи от него. Необходимо е да се знае, че всеки модел е известно опростяване, само повече или по-малко ясно копие на оригинала, някакъв вид...
Всяко преживяване е „жесток тест на природата” (И. Мюлер, Мюлер), на нейните закони. „Самата природа не нарушава своите закони“ (Леонардо да Винчи). Но всеки експеримент, всяко моделиране (на инфекция, рак, хипертония и т.н.) неизбежно е свързано с някакъв вид нарушение на законите и често с изкривяване на последните, тъй като законът все още не е известен на експериментатора и съответните търсения понякога се основават на...
Изглежда, че няма такова нещо като абсолютно решаващ експеримент, особено в биологията, където има толкова много неизвестни количества, че е трудно да се постави надеждно контролиран експеримент. Ако говорим за теория, тогава експериментът „не може да я потвърди напълно и окончателно“, защото „един и същ резултат може да последва от различни теории“. С най-голяма и все пак не абсолютна точност един експеримент може...
Експериментът трябва да се основава на практиката на наблюдение и на теоретичните конструкции, които тази практика поражда. С други думи, първо наблюдение, след това обобщаване на мисли и идеи, произтичащи от наблюденията, и накрая моделиране. Следователно „необходимостта от експеримент“ произтича от практическия опит, когато възникват идеи и въпроси като отправна точка за опита (С. П. Боткин). Самият експериментален метод...
Изкуственото инжектиране на пневмококи в заек и предизвикването му да развие пневмония формално говори за пневмококи като причинител на инфекцията. Въпреки това е добре известно, че пневмонията обикновено възниква спонтанно, тоест автоинфекция, без екзогенна инфекция. Очевидно е, че направеният извод за пневмокока като причинител или „основен причинител” на пневмонията е подходящ само за определената експериментална постановка, т.е.
Глава 1. Литературен преглед
1. Хипотези и теории за патогенезата на атеросклерозата
1.1. Холестеролова теория за атеросклерозата
1.2. Хипотеза за окислителна модификация
1.3. Инфекциозно и автоимунно възпаление като причина за развитие на атеросклероза
1.4. Епикардната и периваскуларната мастна тъкан като причина за развитие на атеросклероза
2. Експериментални модели на атеросклероза
2.1. Диета с хиперхолестерол като метод за предизвикване на атеросклероза при експериментални животни
2.2. Генетични модели на атеросклероза
2.3. Инфекциозни модели на атеросклероза
2.4. Автоимунни модели на атеросклероза
Глава 2. Организация и методи на изследване
2.1. Организация на изследването
2.2. Материали и методи на изследване
Глава 3. Резултати от изследванията
3.1. Разработване на схема за имунизация на плъхове с нативен човешки LDL, предизвикваща хиперимунен отговор срещу nLDL
3.2. Кинетика на антитела срещу нативен човешки LDL и автоантитела срещу LDL при плъхове, имунизирани с нативен човешки LDL
3.3. Фракции на серумния холестерол и липиден състав
надбъбречни жлези на плъхове, имунизирани с нативен човешки LDL
3.3.1. Липопротеинов холестерол с ниска и висока плътност при плъхове,
имунизирани с човешки nLDL
3.3.2. Липиден състав на надбъбречните жлези на плъхове, имунизирани с nLDL
човек
3.4. Морфологичен и хистологичен анализ на сърцето и аортната дъга в
плъхове, имунизирани с нативен човешки LDL
3.4.1. Промени в стената на аортната дъга при плъхове, имунизирани с nLDL
човек
3.4.2. Епикардна и периваскуларна мазнина при плъхове,
имунизирани с нативен човешки LDL
Глава 4. Обсъждане на резултатите
4.1. Анализ на адекватността на експерименталния модел на атеросклероза при плъхове, причинена от имунизация с нативен човешки LDL към човешка атеросклероза
4.2. Модел на атеросклероза, предизвикана от имунизация с нативен LDL като доказателство за хипотезата, че автоимунна реакция срещу нативен LDL е причина за развитието на дислипопротеинемия и
атеросклероза
Литература
СПИСЪК НА СЪКРАЩЕНИЯТА
DHEA - дехидроепиандростерон
ИБС - коронарна болест на сърцето
NIDDM - инсулинонезависим захарен диабет
ELISA - ензимен имуноанализ
HDL - липопротеини с висока плътност
LDL - липопротеини с ниска плътност
NAF - непълен адювант на Freund
nLDL - естествени липопротеини с ниска плътност
PAF - пълен адювант на Freund
CVD - сърдечно-съдови заболявания
PAT - периваскуларна мастна тъкан
FR - физиологичен разтвор
CS - холестерол
ЕАТ - епикардна мастна тъкан
АроЕ-/-мишки - мишки с дефицит на аполипопротеин Е
1LEK-/-мишки - мишки с дефицит на рецептори за липопротеини с ниска плътност
Препоръчителен списък с дисертации
Автоантитела към модифицирани човешки липопротеини и тяхната роля в атерогенезата 2005 г., кандидат на биологичните науки Жданова, Олга Юриевна
Идиотип-анти-идиотипни взаимодействия като механизъм за индукция и развитие на автоимунни реакции 2009 г., доктор на биологичните науки Бедулева, Любов Викторовна
Характеристики на употребата на глюкозаминилмурамил дипептид и лактулоза в комплексната терапия на коронарна болест на сърцето при пациенти в напреднала възраст 2011 г., кандидат на медицинските науки Макарова, Марина Ивановна
Антитела към невротрансмитерите в механизмите на свързаните със стрес поведенчески реакции 2013 г., доктор на медицинските науки Умрюхин, Алексей Евгениевич
Окислително-антиоксидантен потенциал на липопротеините с ниска плътност и съдържанието на производни на окисления холестерол в динамиката на развитието на коронарна атеросклероза 2004 г., кандидат на биологичните науки Кащанова, Елена Владимировна
Въведение в дисертацията (част от автореферата) на тема „Експериментален модел на атеросклероза при плъхове, причинена от имунизация с естествени човешки липопротеини с ниска плътност”
Въведение
Уместността на изследването
Атеросклерозата е в основата на широк спектър от сърдечно-съдови заболявания. Въпреки многобройните проучвания, етиологията и патогенезата на това заболяване остават неизвестни. Изясняването на механизмите на индукция и развитие на атеросклерозата при хора е трудно поради дългосрочния предклиничен стадий на развитие на атеросклерозата и липсата на неинвазивни форми за нейното откриване. В резултат на това повечето изследвания върху хора се провеждат след появата на клиничните признаци на заболяването, когато то вече е напреднало. Експерименталните модели ни позволяват да изследваме причините за атеросклерозата и нейните ранни, предклинични стадии. В допълнение, възможността за предизвикване на атеросклероза при опитни животни с помощта на каквото и да е влияние е ефективен начин да се тества ролята на определени фактори в инициирането на развитието на атеросклероза.
Обсъждат се много външни и вътрешни фактори, водещи до атеросклероза. Сред тях са прекомерният прием на холестерол, автоимунни реакции, възпаление и дефекти в гените на липопротеиновия рецептор. Експерименталната атеросклероза се причинява главно от диета с хиперхолестерол и генетични манипулации, водещи до нарушаване на метаболизма на липопротеините. Съществуващите експериментални модели обаче не възпроизвеждат напълно типичните човешки клинични стадии и признаци на развитие на атеросклероза. Въпреки многобройните проучвания, проведени върху тези експериментални модели, все още не е възможно да се идентифицират водещите етиологични фактори на атеросклерозата или да се докаже, че те са факторите, които причиняват заболяването при експериментални животни. Една от най-привлекателните хипотези днес за причините за развитието на атеросклерозата е хипотезата, според която окислението на липопротеините с ниска плътност (LDL) води до тяхната модификация и развитие на автоимунна реакция към тях.
Автоимунната реакция в рамките на тази хипотеза се разглежда или като водещ етиологичен фактор на заболяването, или като една от основните патогенетични връзки. Въпреки това, наличните днес данни за нивото на автоантитела към окисления LDL при пациенти с атеросклероза и здрави хора са противоречиви; не е открита ясна връзка между нивото на автоантитела към окисления LDL и атеросклерозата. В същото време има факти, които показват, че целта на автоимунната реакция може да не е окислен, а нативен LDL (nLDL). По-специално, това се доказва от факта, че нивото на автоантитела срещу nLDL при атеросклероза е по-високо, отколкото при здрави хора. Последните открития от изследвания показват, че автоимунните Т клетки, разпознаващи апопротеин В100 епитопи на нативния LDL, насърчават развитието на атеросклероза, докато инхибирането на Т-клетъчния отговор срещу нативния LDL потиска развитието на атеросклероза. Следователно може да се предположи, че причината за дислипопротеинемията и атерогенезата е развитието на автоимунна реакция към нативния LDL. В съответствие с тази хипотеза, развитието на автоимунна реакция срещу nLDL при експериментални животни трябва да бъде придружено от появата на дислипопротеинемия и атеросклеротични промени в съдовата стена, подобни на тези, наблюдавани при човешка атеросклероза.
Един от начините за предизвикване на автоимунни заболявания при животни е да ги имунизираме с хетероложен антиген, подобен на автоантигена. В това проучване се опитахме да индуцираме автоимунна реакция към nLDL при плъхове, като ги имунизираме с естествени човешки липопротеини с ниска плътност.
Цел на работата: да се провери хипотезата, че експериментално индуцирана автоимунна реакция срещу естествени липопротеини с ниска плътност при плъхове ще бъде придружена от метаболитни и патофизиологични промени, подобни на промените в атеросклерозата при хора.
1. Разработете схема за имунизация на плъхове с нативни човешки липопротеини с ниска плътност, предизвикващи хиперимунен отговор срещу тях.
2. Да се изследва кинетиката на антителата към нативните човешки липопротеини с ниска плътност, автоантителата към нативните липопротеини с ниска плътност, нивото на холестерола на липопротеините с ниска и висока плътност, общия холестерол в серума на плъхове, имунизирани с нативни човешки липопротеини с ниска плътност липопротеини.
3. Извършете морфологичен и хистологичен анализ на сърцето и аортната дъга при плъхове, имунизирани с естествени човешки липопротеини с ниска плътност.
Разпоредби за защита:
1. Имунизацията на плъхове с естествени човешки липопротеини с ниска плътност предизвиква автоимунна реакция срещу естествени липопротеини с ниска плътност, която е придружена от развитие на дислипопротеинемия, увеличаване на обема на периваскуларната, епикардна мазнина и атеросклеротични промени в стената на аортна дъга.
2. Атеросклерозата при плъхове, предизвикана от имунизация с нативни човешки липопротеини с ниска плътност, може да бъде адекватен експериментален модел на човешка атеросклероза.
Научна новост на изследването
Разработен е нов експериментален модел на атеросклероза при плъхове, причинена от имунизация с естествени хетероложни липопротеини с ниска плътност. Експерименталният плъх модел на атеросклероза възпроизвежда метаболитни и патофизиологични промени, характерни за човешката атеросклероза, като дислипидемия, увеличен обем на периваскуларна и епикардна мазнина, натрупване на левкоцити и отлагане на липиди в съдовата стена, дезорганизация на средата и разрушаване на интимата и следователно може да бъде се счита за адекватен модел на човешка атеросклероза. Резултатите от изследването дават нови знания за механизмите на развитие
атеросклероза бяха получени убедителни факти в полза на хипотезата за водещата роля на автоимунната реакция срещу nLDL в развитието на дислипопротеинемия и атеросклероза. Експерименталният модел има евристичен потенциал и открива перспективи за изследване на причинно-следствените връзки между процесите, участващи в патогенезата на атеросклерозата; механизми за нарушаване на естествената толерантност към nLDL, което води до атеросклероза.
Практическо значение на изследването
Експерименталният модел на атеросклерозата отваря перспективата за идентифициране на ранни диагностични маркери на атеросклероза, разработване на нови диагностични средства, терапия и оценка на тяхната ефективност. Предимството на модела на атеросклероза при плъхове е възпроизводимостта, рентабилността и лекотата на прилагане. Експерименталният модел на атеросклероза може да се използва както в научните изследвания, така и в учебния процес. Резултатите от изследването са въведени в учебния процес в специалните курсове „Експериментална имунология“, „Клинична имунология“ на магистърската програма „Имунобиотехнология“ във Факултета по медицинска биотехнология на Федералната държавна бюджетна образователна институция за висше професионално образование „Удмурт“. държавен университет”.
Апробация на резултатите от изследването
Основните положения на дисертацията бяха докладвани и обсъдени на VIII, X конференции на имунолозите от Урал „Актуални проблеми на фундаменталната и клинична имунология и алергология“ (Сиктивкар, 2010 г., Тюмен, 2012 г.); XI международна задочна научно-практическа конференция „Иновации в науката” (Новосибирск, 2012); II Всеруска научна конференция на младите учени „Проблеми на биомедицинската наука на третото хилядолетие“, (Санкт Петербург, 2012 г.). По темата на дисертацията са публикувани 6 статии, включително 4 статии във водещи руски рецензирани научни списания, включени в Списъка на публикациите, препоръчани от Висшата атестационна комисия на Министерството на образованието и науката на Русия.
Структура на дисертационния труд.
Работата е представена на 93 страници и се състои от въведение, преглед на литературата, описание на материалите и методите на изследване, резултатите от собствените изследвания, тяхното обсъждане, заключения и приложение. Списъкът с литература включва 153 източника, включително 13 местни и 140 чуждестранни. Творбата е илюстрирана с 22 рисунки и 3 таблици.
Подобни дисертации по специалност “Клинична имунология, алергология”, 14.03.09 г. код ВАК
Фракционен и субфракционен състав на серумните липопротеини при експериментална мишка липемия, причинена от полоксамер 407 и Triton WR 1339 2013 г., кандидат на биологичните науки Логинова, Виктория Михайловна
Влиянието на факторите на околната среда върху разпространението на хиперхолестеролемия и атерогенна дислипопротеинемия 2006 г., кандидат на биологичните науки Шарапова, Наталия Василиевна
Спектърът на мутационно увреждане на гена на рецептора на липопротеините с ниска плътност в популацията от пациенти с фамилна хиперхолестеролемия в Санкт Петербург 1999 г., кандидат на биологичните науки Шакир Хамид
Относно възможността за използване на имуномодулатори за коригиране на алкохолната мотивация 2005 г., кандидат на биологичните науки Кушнир, Екатерина Александровна
Сравнителна оценка на ефективността на антиатеросклеротичното действие на лекарства от естествен произход 1998 г., кандидат на биологичните науки Христич, Марина Николаевна
Заключение на дисертацията на тема „Клинична имунология, алергология”, Фомина, Ксения Владимировна
1. Еднократна имунизация на плъхове Vistar с нативни човешки липопротеини с ниска плътност в доза от 200 μg в непълен адювант на Freund индуцира при плъхове производството на автоантитела срещу нативни липопротеини с ниска плътност на плъх.
2. Автоимунна реакция срещу нативни липопротеини с ниска плътност при плъхове е придружена от развитие на дислипопротеинемия, степента на дислипопротеинемия зависи от нивото на производство на автоантитела срещу нативни липопротеини с ниска плътност.
3. Дислипопротеинемията при плъхове, причинена от имунизация с естествени човешки липопротеини с ниска плътност, е придружена от намаляване на нивото на холестерил естери в надбъбречните тъкани, увеличаване на обема на периваскуларната и епикардна бяла мастна тъкан, натрупване на левкоцити и липиди отлагане в стената на аортната дъга, деструкция на интимата, удебеляване и оголване на медията.
4. Метаболитни и патофизиологични промени, предизвикани при плъхове чрез имунизация с естествени липопротеини с ниска плътност, са подобни на ранните признаци на развитие на атеросклероза при хора.
Списък с литература за дисертационно изследване Кандидат на биологичните науки Фомина, Ксения Владимировна, 2013 г
Литература
1. Бобришев Ю.В. Клетъчни механизми на атеросклероза: вроден имунитет и възпаление / Yu.V. Бобришев, В.П. Карагодин, Ж.И. Ковалевская [и др.] // Фундаментални науки и практика. - 2010. - Т. 1, № 4. - стр. 140-148.
2. Ватутин Н.Т. Инфекцията като фактор за развитието на атеросклероза и нейните усложнения / N.T. Ватутин, В.А. Чупина // Кардиология. - 2000. - № 2. - С. 13-22.
3. Гланц С. Медицинска и биологична статистика / С. Гланц. - М., 1999. - 459 с.
4. Грибанов Г.А. Методи за анализ на липиди. Лабораторен семинар за студенти от Химико-биологическия факултет / A.G. Грибанов; Калинин държавен университет. - Калинин, 1980. - 51 с.
5. Климов А.Н. Автоимунна теория за патогенезата на атеросклерозата и нови начини за нейното лечение / A.N. Климов // Бюлетин на Руската академия на медицинските науки. -2003. -№ 12. -С.29-34.
6. Климов А.Н. Метаболизъм на липиди и липопротеини и неговите нарушения // A.N. Климов, Н.Г. Никулчева. - Санкт Петербург: Питър Ком, 1999. - 512 с.
7. Корепанов А.С. Идиотипни механизми, регулиращи развитието на автоимунна реакция в експериментален модел на автоимунна хемолитична анемия при мишки / A.S. Корепанов, Л.В. Бедулева, И.В. Меншиков, А.Б. Князев // Бюлетин на Удмуртския университет. - 2012. - Епизод 6. Биология. Геонауки. - № 2. - С. 62-67.
8. Меншиков И.В. Автоимунни реакции в патогенезата на атеросклерозата / M.I. Макарова, Н.И. Булатова, Л.В. Бедулева, Н.Х. Абишева, М.Г. Поздеева, Х.А. Сиднева, А.А. Санникова, Е.В. Обухова // Имунология. - 2010. - № 5. -
9. Хлустов В.Н. Автоимунни механизми в патогенезата на атеросклерозата // Напредък в съвременната естествена наука. - 2007. - № 12. - С. 66.
10. Хлустов В.Н. Количествено определяне на автоантитела към липопротеини с ниска плътност / V. N. Khlustov // Клинична лабораторна диагностика. 1999. - № 4. - стр. 17-20.
11. Хлустов В.Н. Метод за количествено определяне на автоантитела към липопротеини с ниска плътност в кръвния серум / V.N. Хлустов // Патент за изобретение. - № 2137134. - 1999г.
12. Челнокова Н.О. Клинични и морфологични основи за моделиране на хемодинамиката в системата на коронарните артерии, като се вземе предвид тяхното взаимодействие с миокарда: (преглед) / N.O. Челнокова, А.А. Голядкина, О.А. Шчучкина // Саратовско медицинско научно списание. - 2011. - Т.7, № 4. - стр. 762-768.
13. Ярилин А.А. Основи на имунологията / A.A. Ярилин. - М .: Медицина, 1999 - 607 с.
14. Afek A. Имунизация на мишки с дефицит на липопротеинов рецептор с ниска плътност (LDL-RD) с протеин на топлинен шок 65 (HSP-65) насърчава ранна атеросклероза / A. Afek, J. George, B. Gilburd, L. Rauova, I Goldberg, J. Kopolovic, D. Harats, Shoenfeld Y. //J Autoimmun. - 2000. - 14. - С. 115-121.
15. Akishita M. Ниско ниво на тестостерон като предиктор на сърдечно-съдови събития при японски мъже с коронарни рискови фактори / M. Akishita, M. Hashimoto, Y. Ohike, S. Ogawa, K. Iijima, M. Eto, Y. Ouchi / / Атеросклероза. - 2010. - кн. 210. -
16. Алагона П. младши Отвъд LDL холестерола: ролята на повишените триглицериди и ниския HDL холестерол в остатъчния риск от ССЗ, оставащ след терапия със статини / P. Alagona Jr. // Am J Manag Care. - 2009. - кн. 15. - С.65-73.
17. Alviar C.L. Инфекциозна атеросклероза: жива ли е хипотезата? Клинично базиран подход към дилемата / C.L. Алвиар, Дж. Echeverri, N.I. Jaramillo, C.J. Фигероа, Дж.П. Cordova, A. Korniyenko, J. Suh, A. Paniz-Mondolfi // Med Hypotheses. - 2011,- кн. 76.-P. 517-521.
18. Животински модели за автоимунни и възпалителни заболявания / Актуални протоколи в имунологията. - 1996. - от John Wiley & Sons, Inc.
19. Ayada K. Хронични инфекции и атеросклероза / K. Ayada, K. Yokota, K. Kobayashi, Y. Shoenfeld, E. Matsuura, K. Oguma // Ann N Y Acad Sci. - 2007. -Кн. 1108. - С. 594-602.
20. Бачар Г.Н. Епикардната мастна тъкан като предиктор на коронарна артериална болест при асимптоматични субекти / G.N. Бачар, Д. Дикер, Р. Корновски, Е. Атар // Am J Cardiol. - 2012. - кн. 110. - С. 534-538.
21. Barter P. HDL-C: роля като модификатор на риска / P. Barter //Atheroscler Suppl. - 2011. -Кн. 12.-P. 267-270.
22. Beduleva L. Роля на идиотип-анти-идиотипни взаимодействия в индуцирането на колаген-индуциран артрит при плъхове / L. Beduleva, I. Menshikov // Immunobiology. -2010.-Т.215. - С. 963-970.
23. Blessing E. Chlamydia pneumoniae предизвиква възпалителни промени в сърцето и аортата на нормохолестеролемични C57BL/6J мишки / E. Blessing, T.M. Лин, Л.А. Кембъл, M.E. Rosenfeld, D. Lloyd, C. Kuo // Infect Immun. - 2000. - кн. 68.-P. 4765^768.
24. Blouin K. Андрогенен метаболизъм в мастната тъкан: последните постижения / K. Blouin, A. Veilleux, V. Luu-The, A. Tchernof // My Cell Endocrinol. - 2009. - кн. 301. -P. 97-103.
25. Борковски A.J. Уравновесяване на плазмения и надбъбречния холестерол при човека / A.J. Borkowski, S. Levin, C. Delcroix, J. Klastersky // J Appl Physiol. - 1970. - кн. 28.-P. 42^9.
26. Boullier A. Откриване на автоантитела срещу окислени липопротеини с ниска плътност и на IgG-свързани липопротеини с ниска плътност при пациенти с коронарна артериална болест / A. Boullier, M. Hamon, E. Walters-Laporte, F. Martin-Nizart, R. Скумрия, J.C. Fruchart, M. Bertrand, P. Duriez // Clin Chim Acta. - 1995. - кн. 238. - С. 1-10.
27. Бъкли К.Д. Защо се натрупват левкоцити в хронично възпалени стави / C.D. Бъкли // Ревматология. - 2003. - Т.42. - С. 1433-1444.
28. Che J. Серумните автоантитела срещу човешки окислени липопротеини с ниска плътност са обратно пропорционални на тежестта на коронарните стенотични лезии, изчислени чрез оценка на Gensini / J. Che, G. Li, W. Wang, Q. Li, H. Liu, K. Chen, T. Liu // Cardiol J. - 2011. -Vol. 18. - С. 364-370.
29. Чен X.H. Инфекцията с Helicobacter pylori засилва атеросклерозата при диета с висок холестерол, хранена с C57BL/6 мишки / X.H. Чен, J.B. Wang, Y.S. Wang, Z.M Liu, Y. Li // Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. - 2010. - кн. 38. - С. 259-263.
30. Chisolm G.M. Хипотезата за окислителна модификация на атерогенезата: преглед / G.M. Chisolm, D. Steinberg // Free Radic Biol Med. - 2000. - кн. 28. -P. 1815-1826.
31. Corona G. Тестостерон, сърдечно-съдови заболявания и метаболитен синдром / G. Corona, G. Rastrelli, L. Vignozzi, E. Mannucci, M. Maggi // Best Pract Res Clin Endocrinol Metab. - 2011. - кн. 25. - С. 337-353.
32. Cziraky M.J. Насочване към нисък HDL-холестерол за намаляване на остатъчния сърдечно-съдов риск в условията на управлявана грижа / M.J. Cziraky, K.E. Уотсън, Р.Л. Talbert // J Manag Care Pharm. - 2008. - кн. 14. - С. 3-28.
33. Daugherty A. Миши модели на атеросклероза / A. Daugherty // Am J Med Sci. -2002.-кн. 323.-P. 3-10.
34. De Pergola G. Метаболизмът на мастната тъкан: ролята на тестостерона и дехидроепиандростерона / G. De Pergola // Int J Obes Relat Metab Disord. - 2000. -Т.24. - С. 59-63.
35. Декстър Р.Н. Стимулиране на поемането на надбъбречен холестерол от плазмата чрез адренокортикотропин / R.N. Декстър, Л.М. Фишман, Р.Л. Ней // Ендокринология. -1970.- Т.87. - С.836-846.
36. Djaberi R. Връзка на епикардната мастна тъкан с коронарната атеросклероза / R. Djaberi, J.D. Schuijf, J.M. van Werkhoven и др. // Am J Cardiol. - 2008. - кн. 102.-P. 1602-1607.
37. Дрю А. Атеросклероза. Експериментални методи и протоколи / A. Drew. - 243 c.
38. Engelmann M.G. Хроничната периваскуларна инокулация с Chlamydophila pneumoniae води до образуване на плака in vivo / M.G. Engelmann, C.V. Redl, J. Pelisek, C. Barz, J. Heesemann, S. Nikol // Lab Invest. - 2006. - кн. 86. - С. 467-476.
39. Производител C.G. Вирусно-индуцирана атеросклероза/ C.G. Fabricant, J. Fabricant, M.M. Litrenta, C.R. Миник // J Exp Med. - 1978. - кн. 148. - С. 335-340.
40. Fan J. Хранени с холестерол и трансгенни модели на зайци за изследване на атеросклероза / J. Fan, T. Watanabe // J Atheroscler Thromb. - 2000. - кн. 7-P. 26-32.
41. Fazio S. Миши модели на хиперлипидемия и атеросклероза / S. Fazio, M.F. Линтън // Front Biosci. - 2001. - кн. 6. - С. 515-525.
42. Franch A. Времеви курс на антитела срещу IgG и колаген тип II при адювантен артрит. Роля на приложението на микобактерии в производството на антитела / A. Franch, S. Cassany, C. Castellote, M. Castell // Immunobiology. - 1994. - кн. 190. - С. 93104.
43. Fukui M. Роля на ендогенния андроген срещу инсулинова резистентност и атеросклероза при мъже с диабет тип 2 / M. Fukui, Y. Kitagawa, H. Ose, G. Hasegawa, T. Yoshikawa, N. Nakamura // Curr Diabetes Rev. - 2007. - кн. 3. - С. 25-31.
44. Fuster J.J. Животински модели на атеросклероза / J. J. Fuster, A.I. Кастило, С. Сарагоса, Б. Ибанез, В. Андрес // Prog Mol Biol Transi Sci. - 2012. - кн. 105. -P. 1-23.
45. Галкина Е. Имунни и възпалителни механизми на атеросклерозата / Е. Галкина, К. Лей // Annu. Rev. Immunol. - 2009. - кн. 27. - С. 165-197.
46. Galkina E. Набирането на лимфоцити в стената на аортата преди и по време на развитието на атеросклероза е частично зависимо от L-селектин / E. Galkina, A. Kadi, J. Sanders, D. Varughese, I. J. Sarembock, K. Ley // Вестник за експериментална медицина. - 2006. - кн. 203. - Не. 5. - С. 1273-1282.
47. Gebbers J.O. Атеросклероза, холестерол, хранене и статини - критичен преглед / J.O. Gebbers // Германска медицинска наука. - 2007. - кн. 5. - Документ 04.
48. George J. Автоимунитет при атеросклероза: уроци от експериментални модели / J. George, A. Afek, B. Gilburd, D. Harats, Y. Shoenfeld // Lupus. - 2000. - кн. 9. -Ст. 223-227.
49. George J. Индуциране на ранна атеросклероза при мишки с дефицит на LDL-рецептор, имунизирани с бета2-гликопротеин I / J. George, A. Afek, B. Gilburd, M. Blank, Y. Levy, A. Aron-Maor и др. ал. // Тираж. - 1998. - кн. 98. - С. 1108-1115.
50. Godfried S. Потенциране на атеросклеротични лезии при зайци чрез високо диетично ниво на витамин E / S. Godfried, G.F. Combs, J. Saroca, L.A. Dillingam // British Journal of Nutrition. - 1989. - кн. 61. - С. 607-617.
51. Gounopoulos P. Антитела към окислен липопротеин с ниска плътност: епидемиологични проучвания и потенциални клинични приложения при сърдечно-съдови заболявания / P. Gounopoulos, E. Merki, L.F. Хансен, С.Х. Чой, С. Цимикас // Minerva Cardioangiol. - 2007. -Кн. 55.-Стр. 821-837.
52. Grummer R.R. Преглед на метаболизма на липопротеиновия холестерол: значение за функцията на яйчниците / R.R. Гръмър, Д. Дж. Карол // J.Anim.Sci. - 1988. - кн. 66. -P.3160-3176.
53. Gwynne J. T. Поглъщане на надбъбречен холестерол от плазмени липопротеини: Регулиране чрез кортикотропин / J. T. Gwynne, D. Mahaffee, H. B. Brewer, J. R., R. L. Ney // Proc. Natl. акад. Sci. - 1976. - кн. 73, бр. 12. - С. 4329-4333.
54. Хаджийски П. Експериментални модели на атеросклероза. Принос, граници и тенденции / П. Хаджийски, М.Ц. Bourdillon, Y. Grosgogeat // Arch Mai Coeur Vaiss. -1991.-кн. 84.-Стр. 1593-1603.
55. Hansson G.K. Атеросклерозата и имунната система / G. K. Hansson, G.P. Берн // Acta Paediatr Suppl. - 2004. - кн. 93. - С. 63-69.
56. Hansson G.K. Атеросклерозата - имунно заболяване: Лекцията на Аничков 2007 /G.K. Hansson // Атеросклероза. - 2009. - кн. 202. - С. 2-10.
57. Hansson G.K. Възпаление и имунен отговор при атеросклероза / G.K. Hansson//Curr Atheroscler Rep. - 1999.-кн. 1. - С. 150-155.
58. Henrichot E. Производство на хемокини от периваскуларна мастна тъкан: роля в патогенезата на атеросклерозата? / E. Henrichot, C.E. Juge-Aubry, A. Pernin, J.C. Паче, В. Велебит, Дж.М. Дейър, П. Меда, К. Чизолини, К.А. Meier // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2005. - кн. 25. - С. 2594-2599.
59. Hermansson A. Инхибирането на Т-клетъчния отговор към нативния липопротеин с ниска плътност намалява атеросклерозата / A. Hermansson, D. Ketelhuth, D. Strodthoff, et al. // J Exp Med. - 2010. - кн. 207. - С. 1081-1093.
60. Holoshitz J. Артрит, индуциран при плъхове от клонирани Т лимфоцити, отговарящи на
микобактерии, но не и към колаген тип II / J. Holoshitz, A. Matitiau, I. R. Cohen // J Clin Invest. - 1984. - кн. 73. - С. 211-215.
61. Hulthe J. Титрите на антителата срещу окисления LDL не са повишени при пациенти с фамилна хиперхолестеролемия / J. Hulthe, J. Wikstrand, A. Lidell, I. Wendelhag, G.K. Hansson, O. Wiklund // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 1998. - кн. 18. -P. 1203-1211.
62. Iacobellis G. Епикардна мастна тъкан: анатомични, биомолекулярни и клинични връзки със сърцето / G. Iacobellis, D. Corradi, A.M. Sharma // Nat Clin Pract Cardiovasc Med. - 2005. - кн. 2. - P.536-543.
63. Iacobellis G. Епикардна мастна тъкан: физиологично възникване, патофизиологични и клинични характеристики / G. Iacobellis, A.C. Bianco // Тенденции Endocrinol Metab. - 2011. - кн. 22. - P.450-457.
64. Imaizumi K. Диета и атеросклероза при мишки с дефицит на аполипопротеин E / K. Imaizumi // Biosci Biotechnol Biochem. - 2011. - кн. 75. - С. 1023-1035.
65. Jawien J. Миши модели на експериментална атеросклероза / J. Jawien, P. Nastalek, R. Korbut // J Physiol Pharmacol. - 2004. - кн. 55. - С. 503-517.
66. Jiang X. Окислени липопротеини с ниска плътност - знаем ли достатъчно за тях? / X. Jiang, Z. Yang, A.N. Chandrakala, D. Pressley, S. Parthasarathy // Cardiovasc Drugs Ther.-2011,- Vol. 25. - С. 367-377.
67. Karabinos I. Повишени серумни титри на автоантитела срещу окислен LDL холестерол при млади здрави възрастни /1. Karabinos, S. Koulouris // Атеросклероза. -2007. - том. 192. - С. 448-450.
68. Kern J.M. Индуцирано от Chlamydia pneumoniae патологично сигнализиране във васкулатурата / J.M. Kern, V. Maass, M. Maass // FEMS Immunol Med Microbiol. -2009.-кн. 55. - С.131-139.
69. Кожич З.З. Животински модели в изследването на атеросклерозата / Z.Z. Kojic // Srp Arh Celok Lek. -2003. - том. 131. - С. 266-270.
70. Kruif M.D. Инфекции с Chlamydia pneumoniae при миши модели: значение за изследване на атеросклероза / M.D. de Kruif, E.C. ван Горп, Т.Т. Келър, Дж.М. Ossewaarde, H. ten Cate // Cardiovasc Res. - 2005. - кн. 65. - С. 317-327.
71. Kruth H.S. Макропиноцитозата е ендоцитният път, който медиира образуването на пенести клетки на макрофаги с нативен липопротеин с ниска плътност / H.S. Крут, Н.Л. Jones, W. Huang, B. Zhao, I. Ishii, J. Chang, C.A. Combs, D. Malide, W.Y. Zhang // J Biol Chem. - 2005. - кн. 280. - С. 2352-2360.
72. Kruth H.S. Рецепторно независими механизми на пиноцитоза на флуидна фаза за индуциране на образуване на пенести клетки с нативни липопротеинови частици с ниска плътност / H.S. Kruth // Curr Opin Lipidol. - 2011. - кн. 22. - С. 386-393.
73. Krysiak R. Актуални възгледи за ролята на дехидроепиандростерона във физиологията, патологията и терапията / R. Krysiak, D. Frysz-Naglak, B. Okopien // Pol Merkur Lekarski. - 2008. - кн. 24. - С. 66-71.
74. Kurano M. Етиология на атеросклерозата - специално позоваване на бактериална инфекция и вирусна инфекция / M. Kurano, K. Tsukamoto // Nihon Rinsho. - 2011. - кн. 69. -P. 25-29.
75. Leinonen J.S. Нивото на автоантитела срещу окислен LDL не е свързано с наличието на коронарна болест на сърцето или диабетно бъбречно заболяване при пациенти с неинсулинозависим захарен диабет / J.S. Leinonen, V. Rantalaiho, P. Laippala, O. Wirta, A. Pasternack, H. Alho, O. Jaakkola, S. Yla-Herttuala, T. Koivula, T. Lehtimaki // Free Radic Res. - 1998. - кн. 29. - С. 137-141.
76. Ли Дж.З. Дългосрочно проследяващо проучване на нивата на серумните липиди и коронарна болест на сърцето при възрастни хора / J.Z. Ли, М. Л. Chen, S. Wang, J. Dong, P. Zeng, L.W. Hou // Chin Med J. - 2004. - Vol. 117. С. 163-167.
77. Libby P. Възпаление при атеросклероза: Преход от теория към практика / P. Libby, Y. Okamoto, V.Z. Rocha и др. // Circ J. 2010. - Vol. 74. - С. 213-220.
78. Liuba P. Острата инфекция с Chlamydia pneumoniae причинява коронарна ендотелна дисфункция при прасета / P. Liuba, E. Pesonen, I. Paakkari, S. Batra, A. Forslid, P. Kovanen et al. // Атеросклероза. - 2003. - кн. 167. - С. 215-222.
79. Lopes-Virella M.F. Атеросклероза и автоимунитет / M.F. Lopes-Virella, G. Virella // Clin Immunol Immunopathol. - 1994. - кн. 73. - С. 155-167.
80. Maggio M. Приветствайки ниския тестостерон като сърдечно-съдов рисков фактор / M. Maggio, S. Basaria // Int J Impot Res. - 2009. - кн. 21. - С. 261-264.
81. Махабади А.А. Асоциация на обема на перикоронарната мазнина с тежестта на атеросклеротичните плаки в подлежащата коронарна артерия: сегментен анализ / A.A Mahabadi, N. Reinsch, N. Lehmann, J. Altenbernd, H. Kalsch, R.M. Seibel, R. Erbel, S. Mohlenkamp // Атеросклероза. - 2010. - кн. 211. - С. 195-199.
82. Mammi C. Андрогени и мастна тъкан при мъжете: комплексно и реципрочно взаимодействие / C. Mammi, M. Calanchini, A. Antelmi, F. Cinti, G. Rosano, A. Lenzi, M. Caprio, A. Fabbri / / Международен журнал по ендокринология. - 2012. -doi:10.1155/2012/789653
83. Mandal K. Автоимунни механизми на атеросклероза / K. Mandal, M. Jahangiri, Q. Xu // Handb Exp Pharmacol. - 2005. - кн. 170. - С. 723-743.
84. McNamara D. J. Диетичен холестерол и атеросклероза / D. J. McNamara // Biochim Biophys Acta. - 2000. - кн. 1529. - С. 310-320.
85. Medras M. Дефицит на тестостерон и дехидроепиандростерон, общо затлъстяване и висцерално затлъстяване по време на нормално мъжко стареене / M. Medras, E.A. Янковска // Пол Меркур Лекарски. - 2001. - кн. 11. - С. 187-190.
86. Meier C.A. Бяла мастна тъкан, възпаление и атеросклероза / C.A. Майер, С. Thalmann // Bull Acad Natl Med. - 2007. -Кн. 191. - С. 897-908.
87. Меншиков И. Доказателства в полза на ролята на идиотипната мрежа в индукцията на автоимунна хемолитична анемия: теоретични и експериментални изследвания / И. Меншиков, Л. Бедулева // Int Immunol. - 2008. - кн. 20. - С. 193-198.
88. Миронова М. Изолиране и характеризиране на човешки антиоксидантни LDL автоантитела./ М. Миронова, Г. Вирелла, М.Ф. Lopes-Virella // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 1996. - кн. 16. - С. 222-229.
89. Moghadasian M.H. Експериментална атеросклероза: исторически преглед / M.H. Moghadasian // Life Sci. - 2002. - Т.70. - С. 855-865.
90. Муса Ф.Ф. Chlamydia пневмония и съдови заболявания: актуализация / F.F. Mussa, H. Chai, X. Wang, Q. Yao, A.B. Lumsden, C. Chen // J Vase Surg. - 2006. - кн. 43. -P. 1301-1307.
91. Нандакумар К.С. Колаген тип II (Cll)-специфични антитела индуцират артрит в отсъствието на Т или В клетки, но прогресията на артрита се засилва от Cll-реактивни
Т клетки/K.S. Nandakumar, J. Backlund, M. Vestberg // Arthritis Res Ther. - 2004. -Кн. 6. - С. 544-550.
92. Nilsson J. В-клетката при атеросклероза: обединяване с лошите? / J. Nilsson, G.N. Fredrikson // Clin Chem. - 2010. - кн. 56. - С. 1789-1791.
93. Охман М.К. Периваскуларната висцерална мастна тъкан индуцира атеросклероза при мишки с дефицит на аполипопротеин Е / M.K. Оман, У. Луо, Х. Уанг, К. Гуо, У. Абдала, Х. М. Русо, Д. Т. Eitzman // Атеросклероза. - 2011. - кн. 219. -P. 33-39.
94. Оуенс Д.М. Ролята на епикардната и периваскуларната мастна тъкан в патофизиологията на сърдечно-съдовите заболявания / D.M. Ouwens, H. Sell, S. Greulich, J. Eckel // J Cell Mol Med. - 2010. - Том 14. - С. 2223-2234.
95. Palinski W. Антисеруми и моноклонални антитела, специфични за епитопи, генерирани по време на окислителната модификация на липопротеин с ниска плътност // W. Palinski, S. Yla-Herttuala, M.E. Rosenfeld, S. Butler, S.A. Socher, S. Parthasarathy, L. K. Curtiss, J. L. Witztum // Артериосклероза. - 1990. - кн. 10. - С. 325-335.
96. Партхасарати С. Атерогенеза / С. Партхасарати. - C.507
97. Parthasarathy S. Окислен липопротеин с ниска плътност, двулицев Янус при коронарна артериална болест? / S. Parthasarathy, N. Santanam, N. Auge // Biochem Pharmacol. -1998.-кн. 56.-Стр. 279-284.
98. Pasqui A.L. Имунни фактори при атеросклероза / A.L. Pasqui, G. Bova, S. Maffei, A. Auteri//Ann Ital Med Int. -2005.-кн. 20.-С.81-89.
99. Payne G.A. Епикардната периваскуларна мастна тъкан като терапевтична цел при свързана със затлъстяването коронарна артериална болест / G.A. Пейн, M.C. Kohr, J.D. Tune // Br J Pharmacol. - 2012. - кн. 165. - С. 659-669.
100. Рабкин С.В. Епикардна мазнина: свойства, функция и връзка със затлъстяването / S.W. Рабкин // Obes Rev. - 2007. - кн. 8. - С. 253-261.
101. Ravnskov U. Хипотеза остаряла: идеята за диета-сърце / U. Ravnskov // Journal of Clinical Epidemiology. - 2002. - 55. - С. 1057-1063.
102. Ravnskov U. Грешките на липидната хипотеза / U. Ravnskov // Scand Cardiovasc J. - 2008. - Vol. 42. - С. 236-239.
103. Ritskes-Hoitinga J. Атеросклероза при плъхове / J. Ritskes-Hoitinga, A.C. Beynen // Артерия. - 1988.-кн. 16.-P. 25-50.
104. Rose N.R Инфекция, мимики и автоимунно заболяване / N.R. Роуз // J Clin Invest. - 2001. - кн. 107. - С. 943-944.
105. Роси Г.П. Антитела към окислени липопротеини с ниска плътност и ангиографски оценена коронарна артериална болест при бели пациенти / G.P. Rossi, M. Cesari, R. De Toni, M. Zanchetta, G. Maiolino, L. Pedon, C. Ganzaroli, P. Maiolino, A.C. Песина // Тираж. - 2003. - кн. 108. - С. 2467-2472.
106. Sacks H.S. Човешка епикардна мастна тъкан: преглед / H.S. Sacks, J.N. Fain // Am Heart J. - 2007. - Vol. 153. - С. 907-917.
107. Saikku P. Серологично доказателство за връзка на нова Chlamydia, TWAR, с коронарна болест на сърцето и остър миокарден инфаркт / P. Saikku, K. Mattila, M.S. Nieminen и др. // Ланцет. - 1988. - Т.2. - С. 983-986.
108. Sarin S. Клинично значение на епикардната мазнина, измерена с помощта на сърдечна мултисрезова компютърна томография / S. Sarin, C. Wenger, A. Marwaha, A. Qureshi, B.D. Върви, C.A. Woomert, K. Clark, L.A. Nassef, J. Shirani // Am J Cardiol. - 2008. - кн. 102. -P. 767-771.
109. Шах П.К. Остатъчен риск и нива на холестерол в липопротеините с висока плътност: има ли връзка? /П.К. Шах // Rev Cardiovasc Med. - 2011. - кн. 12. - С. 55-59.
110. Shi G. P. Имуномодулация на съдови заболявания: атеросклероза и автоимунитет / G.P. Shi // Eur J Vase Endovasc Surg. - 2010. - кн. 39. - С. 485-494.
111. Singh V. Модели за изследване на атеросклерозата: Механистично прозрение / V. Singh, R.L. Тивари, М. Дикшит, М.К. Barthwal // Текуща съдова фармакология. - 2009. -Кн. 7.-P. 75-109.
112. Spagnoli L.G. Роля на възпалението при атеросклероза / L.G. Spagnoli, E. Bonanno // The Journal of Nuclear Medicine. - том. 48, № 11. - С. 1800-1815.
113. Спенс Дж.Д. Инфекция, възпаление и атеросклероза / J. D. Spence, J. Norris // Удар. - 2003. - кн. 34. - С.333-334.
114. Спироглу С.Г. Адипокини в периаортна и епикардна мастна тъкан: диференциална експресия и връзка с атеросклерозата / S.G. Спироглу,
К. Г. Костопулос, Дж. Н. Варакис, Х.Х. Пападаки // J Atheroscler Thromb. - 2010. -Кн. 17.-P. 115-130.
115. Stassen F.R. Инфекция и атеросклероза. Алтернативен поглед върху една остаряла хипотеза / F.R. Stassen, T. Vainas, C.A. Bruggeman // Pharmacol Rep. - 2008. -Кн. 60. - С. 85-92.
116. Steinberg D. Хипотезата за модификация на LDL на атерогенезата: актуализация /
D. Steinberg // J. Lipid Res. - 2009. - кн. 50. - С. 376-381.
117. Steinberg D. Интерпретативна история на спора за холестерола: част I / D. Steinberg // Journal of Lipid Research. - 2004. - кн. 45. - С. 1583-1593.
118. Steinberg D. Интерпретативна история на спора за холестерола: част II: ранните доказателства, свързващи хиперхолестеролемията с коронарната болест при хората / D. Steinberg // Journal of Lipid Research. - 2004. - кн. 46. - С. 179-190.
119. Stocker R. Роля на оксидативните модификации при атеросклероза / R. Stocker, J.F. Кини младши // Physiol Rev. - 2004. - кн. 84. - С. 1381-1478.
120. Стреблоу Д.Н. Патогените ускоряват ли атеросклерозата? / Д.Н. Стреблоу, С. Л. Orloff, J.A. Нелсън // J Nutr. - 2001. - кн. 131. - С. 2798-2804.
121. Sulzer B., Централна имунна система, себе си и автоимунитет / B. Sulzer, J. Van Hemmen, U. Behn // Bull. математика Biol. - 1994. - кн. 56. - С. 1009-1040.
122. Swanborg, R.H. Животински модели на човешко заболяване. Експериментален автоимунен енцефаломиелит при гризачи като модел за демиелинизиращо заболяване при хора / R.H. Swanborg // Clin. Immunol. Имунопатология. - 1995. - кн. 77. - С. 4-13.
123. Szasz T. Периваскуларна мастна тъкан: повече от просто структурна опора / T. Szasz, R.C. Webb // Clin Sci (Лондон). - 2012. - кн. 122. - С. 1-12.
124. Takahashi M. Възпалителни цитокини в патогенезата на атеросклерозата / M. Takahashi / Nihon Rinsho. - 2011. - кн. 69. - С. 30-33.
125. Thalmann S. Локалните депа на мастната тъкан като сърдечно-съдови рискови фактори / S. Thalmann, C.A. Meier // Cardiovasc Res. - 2007. - кн. 75. - P.690-701.
126. Томпсън Г.Р. История на спора за холестерола във Великобритания / G.R. Томпсън // QJM. - 2009. - кн. 102. - С.81-86.
127. Traish A. M. Дехидроепиандростерон (DHEA) - прекурсорен стероид или активен хормон в човешката физиология / A.M. Траиш, Х.П. Канг, Ф. Саад, А.Т. Guay // J Sex Med. - 2011. - кн. 8. - С. 2960-2982.
128. Трайш А.М. Тестостерон и сърдечно-съдови заболявания: стара идея със съвременни клинични последици / A.M. Траиш, К.Е. Kypreos // Атеросклероза. - 2011. -Кн. 214 (2).-P. 244-248.
129. Трентъм Д.Е. Хуморална и клетъчна чувствителност към колаген при тип II колаген-индуциран артрит при плъхове / D.E. Трентъм, А. Таунс, Х. Андрю, Дж. Р. Дейвид // J Clin Invest. - 1978. - кн. 61. - С. 89-96.
130. Tsai W.C. Връзка между антитяло срещу окислен липопротеин с ниска плътност и степен на коронарна атеросклероза / W.C. Цай, Й.Х. Ли, Т.Х. Чао, Дж.Х. Chen // J Formos Med Assoc. - 2002. - кн. 101. - С. 681-684.
131. Turk J.R. Физическа активност и атеросклероза: кой животински модел? /J.R. Turk, M.H. Laughlin // Can J Appl Physiol. - 2004. - кн. 29. - С. 657-683.
132. Tuttolomondo A. Атеросклерозата като възпалително заболяване / A. Tuttolomondo, D. Di Raimondo, R. Pecoraro, V. Arnao, A. Pinto, G. Licata // Curr Pharm Des. - 2012. - кн. 18. - С. 4266-4288.
133. Ууситупа М.И. Автоантителата срещу окислен LDL не предсказват атеросклеротично съдово заболяване при неинсулинозависим захарен диабет / M.I. Uusitupa, L. Niskanen, J. Luoma, P. Vilja, M. Mercuri, R. Rauramaa, S. Ylä-Herttuala // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 1996. - кн. 16. - С. 1236-1242.
134. Vanderlaan P.A. Тематична обзорна поредица: имунната система и атерогенезата. Необичайните заподозрени: преглед на малките левкоцитни популации при атеросклероза / P.A. Vanderlaan, C.A. Reardon // J Lipid Res. - 2005. - кн. 46. -P. 829-838.
135. Вениант М.М. Размер на липопротеин и чувствителност към атеросклероза при Apoe(-/-) и Ldlr(-/-) мишки / M.M. Вениант, С. Уиткоум, С. Г. Young // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2001. - кн. 21. - С. 1567-1570.
136. Верхаген С.Н. Периваскуларната мастна тъкан като причина за атеросклероза / S.N. Verhagen, F.L. Висерен // Атеросклероза. - 2011. - кн. 214. - С. 3-10.
137. Virella G. Атерогенеза и хуморален имунен отговор към модифицирани липопротеини / G. Virella, M.F. Lopes-Virella // Атеросклероза. - 2008. - кн. 200. -P. 239-246.
138. Wang J.-L. Корелация на възпалителни клетки в адвентицията и образуване и разширяване на атеросклеротични лезии в коронарна артерия на аполипопротеин Е ген нокаут мишки / J-L. Wang, S.-Q. Ма, Л. Ли, G-Q. Лиу, Вей-С. Hu, R. Ma // Китайски журнал по физиология. - 2012. - кн. 56. - doi: 10.4077/CJP.2013.BAA080.
139. Weverling-Rijnsburger A.W. Липопротеиновият холестерол с висока плътност срещу холестерол с ниска плътност като рисков фактор за коронарна артериална болест и инсулт в напреднала възраст / A.W. Weverling-Rijnsburger, I.J. Jonkers, E. van Exel, J. Gussekloo, R.G. Westendorp // Arch Intern Med. - 2003. - кн. 163. - С. 1549-1554.
140. Wick G. Роля на протеина на топлинен шок 65/60 в патогенезата на атеросклерозата / G. Wick, R. Kleindienst, G. Schett, A. Amberger, Q. Xu // Int Arch Allergy Immunol. - 1995.-кн. 107. - С. 130-131.
141. William R. Ware Основната хипотеза, че LDL холестеролът води до атеросклероза, може да е била фалшифицирана чрез неинвазивно изобразяване на тежестта и прогресията на коронарната артерия / R. William // Med Hypotheses. - 2009. - кн. 73. -P. 596-600.
142. Возняк С.Е. Мастната тъкан: новият ендокринен орган? Обзорна статия / S.E. Возняк, Л.Л. Джи, М.С. Wachtel, E.E. Frezza // Dig Dis Sci. - 2009. -Кн. 54. - P.1847-1856.
143. Wucherpfennig K. W. Механизми за индукция на автоимунитет от инфекциозни агенти / K. W. Wucherpfennig // J Clin Invest. - 2001. - кн. 108. -P. 1097-1104.
144. Xu F. Адвентициалните фибробласти се активират в ранните стадии на атеросклероза в мишка с нокаут на аполипопротеин Е / F. Xu, J. Ji, L. Li, R. Chen, W.C. Hu // Biochem Biophys Res Commun. - 2007. - кн. 352. - С. 681-688.
145. Xu Q. Миши модели на артериосклероза: от артериални наранявания до съдови присадки / Q. Xu // Am J Pathol. - 2004. - кн. 165 - С. 1-10.
146. Яни А.Е. Лабораторният заек: животински модел на изследване на атеросклерозата / A.E. Яни // Lab Anim. - 2004. - кн. 38. - С. 246-256.
147. Yerramasu A. Увеличеният обем на епикардната мазнина е независим рисков фактор за ускорено прогресиране на субклинична коронарна атеросклероза / A. Yerramasu, D. Dey, S. Venuraju, D.V. Ананд, С. Атвал, Р. Кордер, Д.С. Berman, A. Lahiri // Атеросклероза. - 2012. - кн. 220. - С. 223-230.
148. Yorgun H. Дебелината на епикардната мастна тъкан предсказва атеросклероза на низходящата торакална аорта, показана чрез мултидетекторна компютърна томография / H. Yorgun, U. Canpolat, T. Hazirolan et al. // Int J Cardiovasc Imaging. - 2012. - кн. 28. -P. 911-919.
149. Yoshida H. Предна линия на окислените липопротеини: ролята на окислените липопротеини в атерогенезата и риска от сърдечно-съдови заболявания / H. Yoshida // Rinsho Byori. -2010 г. -Vol. 58. - С. 622-630.
150. Сарагоса C. Животински модели на сърдечно-съдови заболявания / C. Zaragoza, C. Gomez-Guerrero, J.L. Мартин-Вентура и др. // Journal of Biomedicine and Biotechnology. -2011 г. -doi:10.1155/2011/497841.
151. Zhao D. Окислени липопротеини с ниска плътност и автоимунни антитела при пациенти с антифосфолипиден синдром с анамнеза за тромбоза / D. Zhao, H. Ogawa, X. Wang, G. S. Cameron, D. E. Baty, J. S. Dlott, D. A. Triplett // Am J Clin Pathol - 2001. - Том. 116. - С. 760-767.
152. Zhao Q. Възпаление, автоимунитет и атеросклероза / Q. Zhao // Discov Med. - 2009. - кн. 8. - С. 7-12.
153. URL: http://www.kalenbiomed.com/34product_oldl.html (достъп на 10/01/12).
Изследването е подкрепено от Федералната целева програма на Министерството на образованието и науката на Руската федерация, споразумение № 14.B37.21.0211; AVTSP на Министерството на образованието и науката на Руската федерация „RNPVSh (2009-2011)“, № 2.1.1/2157; държавна поръчка на Министерството на образованието и науката на Руската федерация за изследване на тема „Автоимунни механизми на атеросклероза. Нов експериментален модел на атеросклероза при плъхове” № 4.5505.2011.
Моля, имайте предвид, че научните текстове, представени по-горе, са публикувани само за информационни цели и са получени чрез разпознаване на текст на оригинална дисертация (OCR). Следователно те могат да съдържат грешки, свързани с несъвършени алгоритми за разпознаване. В PDF файловете на дисертациите и резюметата, които предоставяме, няма такива грешки.
125. Атеросклерозата, нейната етиология и патогенеза. Ролята на нарушеното LDL-рецепторно взаимодействие в механизмите на образуване на атеросклеротични плаки. Основни експериментални модели на атеросклероза.
атеросклероза -различни комбинации от промени в интимата на артериите, проявяващи се под формата на фокално отлагане на липиди, сложни въглехидратни съединения, кръвни елементи и продукти, циркулиращи в него, образуване на съединителна тъкан и отлагане на калций.
Експериментални модели
IN 1912 Н. Н. Аничков и С. С. Халатов предлагат метод за моделиране на атеросклероза при зайци чрез въвеждане на холестерол вътре (през сонда или чрез смесване с обикновена храна). Изразени атеросклеротични промени се развиват след няколко месеца при ежедневна употреба на 0,5 - 0,1 g холестерол на 1 kg телесно тегло. Като правило, те са придружени от повишаване на нивото на холестерола в кръвния серум (3-5 пъти в сравнение с първоначалното ниво), което е в основата на предположението за водещата патогенетична роля на хиперхолестеролемията в развитието на атеросклероза. . Този модел е лесно възпроизводим не само при зайци, но и при пилета, гълъби, маймуни и прасета.
При кучета и плъхове, устойчиви на холестерол, атеросклерозата се възпроизвежда от комбинирания ефект на холестерол и метилтиоурацил, който потиска функцията на щитовидната жлеза. Тази комбинация от два фактора (екзогенен и ендогенен) води до продължителна и тежка хиперхолестеролемия (над 26 mmol/l-1000 mg%). Добавянето на масло и жлъчни соли към храната също допринася за развитието на атеросклероза.
При пилета (петли) се развива експериментална атеросклероза на аортата след продължително излагане на диетилстилбестрол. В този случай атеросклеротичните промени се появяват на фона на ендогенна хиперхолестеролемия в резултат на нарушение на хормоналната регулация на метаболизма.
Етиологични фактори :
наследственост
пол (на възраст 40 - 80 години мъжете страдат от атеросклероза и инфаркт на миокарда с атеросклеротичен характер по-често от жените (средно 3 - 4 пъти). След 70 години честотата на атеросклерозата сред мъжете и жените е приблизително един и същ.)
възраст (> 30 години)
ендогенен
2. екзогенен
физическа неактивност
интоксикация (алкохол, никотин, химикали)
артериална хипертония (АН > 160/90)
хормонални нарушения, метаболитни заболявания (захарен диабет, микседем, ↓ функция на половите жлези, подагра, затлъстяване, хиперхолестеролемия)
прекомерно хранене (много диетични мазнини и храни, съдържащи холестерол)
Патогенеза :
Съществуващите теории за патогенезата на атеросклерозата могат да бъдат сведени до две, коренно различни в отговорите на въпроса: какво е първичното и какво е вторичното при атеросклерозата, с други думи, каква е причината и какво е следствието - липоидоза на вътрешния лигавицата на артериите или дегенеративно-пролиферативни промени в последните. Този въпрос е поставен за първи път от Р. Вирхов (1856). Той беше първият, който отговори, като посочи, че "при всички условия процесът вероятно започва с известно разхлабване на основното вещество на съединителната тъкан, от което се състои предимно вътрешният слой на артериите".
Оттогава възниква идеята на немската школа на патолозите и нейните последователи в други страни, според която при атеросклероза първоначално се развиват дистрофични промени във вътрешната обвивка на артериалната стена и отлагането на липиди и калциеви соли е вторично явление. Предимството на тази концепция е, че тя може да обясни развитието на спонтанна и експериментална атеросклероза както в случаите, когато има нарушения на метаболизма на холестерола, така и в тези (което е особено важно), когато няма. Авторите на тази концепция възлагат основна роля на артериалната стена, т.е. субстратът, който е пряко включен в патологичния процес. „Атеросклерозата е не само и не толкова отражение на общи метаболитни промени (в лабораторията те дори могат да бъдат неуловими), а по-скоро производно на собствените структурни, физични и химични трансформации на субстрата на артериалната стена... Основният фактор, водещ до атеросклероза, се крие именно в самата артериална стена, в нейната структура и в нейната ензимна система" (I.V. Davydovsky, 1966).
За разлика от тези възгледи, от експериментите на Н. Н. Аничков и С. С. Халатов, главно благодарение на изследванията на съветски и американски автори, концепцията за ролята в развитието на атеросклерозата на общите метаболитни нарушения в организма, придружени от хиперхолестеролемия, хиперлипемия и хипербеталипопротеинемия, е успешно разработен. От тази гледна точка ранната атеросклероза е следствие от първичната дифузна инфилтрация на липиди, по-специално холестерол, в непроменената вътрешна обвивка на артериите. По-нататъшни промени в съдовата стена (явления на мукоиден оток, дистрофични промени във влакнестите структури и клетъчните елементи на субендотелния слой, продуктивни промени) се развиват поради наличието на липиди в него, т.е. те са вторични.
Първоначално водещата роля в повишаването на нивото на липидите, особено холестерола, в кръвта се приписва на хранителния фактор (прекомерното хранене), което дава името на съответната теория за появата на атеросклероза - хранителна.Много скоро обаче трябваше да бъде допълнен, тъй като стана очевидно, че не всички случаи на атеросклероза могат да бъдат поставени в причинно-следствена връзка с хранителната хиперхолестеролемия. Според комбинираната теория на Н. Н. Аничков, в развитието на атеросклерозата, в допълнение към хранителния фактор, ендогенни нарушения на липидния метаболизъм и неговата регулация, механични ефекти върху съдовата стена, промени в кръвното налягане, главно неговото повишаване, както и важни са дистрофичните изменения на самата артериална стена . Но дори и в тази модификация предишната формула „без холестерол няма атеросклероза“ запази първоначалното си значение. Това се дължи на факта, че развитието на атеросклероза е свързано предимно с нивото на холестерола в кръвния серум.
През следващите години беше показано, че за появата на атеросклероза е важно не само повишаването на съдържанието на холестерол в кръвния серум, но и промяна в съотношението между нивата на холестерола и фосфолипидите (обикновено 0,9). При атеросклероза това съотношение се увеличава. Фосфолипидите намаляват съдържанието на холестерол в кръвния серум, поддържат го в емулгирано състояние и предотвратяват отлагането в стените на кръвоносните съдове. Следователно техният относителен дефицит е един от важните фактори, допринасящи за атерогенезата.
Също толкова важна роля играе качественият състав на мазнините, влизащи в тялото. Обикновено 2/3 от холестерола, въведен в тялото, влиза в химична (естерна) връзка с мастни киселини (главно в черния дроб), за да образува холестеролови естери. Естерификацията на холестерола с ненаситени мастни киселини (линолова, линоленова, арахидонова), съдържащи се в растителните масла и рибеното масло, насърчава образуването на полярно лабилни, лесно разтворими и катаболизирани холестеролни естери. Напротив, естерификацията на холестерола с наситени мастни киселини, предимно от животински произход (стеаринова, палмитинова), допринася за появата на слабо разтворими холестеролни естери, които лесно изпадат от разтвора. Освен това е известно, че способността на ненаситените мастни киселини да намаляват нивото на холестерола в кръвния серум чрез ускоряване на екскрецията и метаболитните му трансформации, както и на наситените мастни киселини, го повишават. Горните факти ни позволяват да заключим, че намаляването на съотношението на ненаситени и наситени мастни киселини допринася за развитието на атеросклероза. Серумните липиди (холестерол, холестерил естери, фосфолипиди, триглицериди) се състоят частично от хиломикрони (фини частици, които не са разтворени в плазмата) и липопротеини - комплекси от α- и β-глобулини и липиди, разтворени в плазмата. α-липопротеините са приблизително 33-60% протеин и 40-67% мазнини (β-липопротеините са приблизително 7-21% и 79-93% съответно.
При атеросклероза съдържанието на β-липопротеини се повишава, предимно с ниско специфично тегло (0,99-1,023). Тези липопротеини се движат със скорост 10-20 Sf, характеризират се с повишено съдържание на холестерол и наситени мастни киселини, относителен дефицит на фосфолипиди и лесно се утаяват. По-пълна физическа и патофизиологична характеристика, както и класификация на видовете атерогенни липопротеини и съответните хиперлипопротеинемии, е извършена от Fredrickson et al (1967).
Очевидно е, че типът „транспорт“, който осигурява доставката на холестерол до съдовата стена по време на атеросклероза, е от съществено значение както за механизма на възникване на атеросклеротичните лезии, определяйки техния характер и тежест, така и за диференцирана диетична и лекарствена терапия.
В допълнение, като се има предвид способността на атерогенните β-липопротеини, след проникването им в съдовата стена, да се комплексират с киселинни гликозаминогликани и гликопротеини, придобивайки антигенни свойства, възможността за производство на автоантитела и развитието на патологичен процес от автоимунен тип е позволено. Това може да бъде улеснено и от появата на автоантигени от продуктите на разпадане на атеросклеротичните плаки, които осигуряват специфична сенсибилизация на тялото.
През последните години се обръща много внимание на изследването на плазмените и тъканните ензими, които разграждат липидите. Установено е, че липолитичната активност при животни, резистентни към хранителна холестеролна атеросклероза (плъхове, кучета), се повишава и, напротив, при животни, възприемчиви към това заболяване (зайци, пилета, гълъби), тя намалява.
При хората, поради възрастта, както и атеросклерозата, липолитичната активност на стената на аортата намалява. Това позволява да се предположи, че в сложната система от механизми, допринасящи за развитието на съдова липоидоза при атеросклероза, определена роля играе дефицитът на липолитични ензими.
Процесите на биосинтеза на холестерола са от голямо значение в патогенезата на атеросклерозата. Последният се образува в животинския организъм през етапа на активен ацетат (ацетил-КоА) от протеини, мазнини и въглехидрати. Черният дроб е основният орган, който синтезира холестерола в тялото. Съдовата стена също не е лишена от способността да синтезира холестерол от ацетат. В него могат да се образуват фосфолипиди и някои мастни киселини. Съдовата стена обаче не е в състояние да осигури образуването на количеството липиди, което се намира в нея по време на атеросклероза. Основният им източник е кръвният серум. Следователно развитието на атеросклероза без прекомерен прием на холестерол отвън може да се обясни с ендогенна хиперхолестеролемия, хиперлипемия и хипербеталипопротеинемия.
Горните концепции за патогенезата на атеросклерозата имат своите силни и слаби страни. Най-ценното предимство на концепцията за общи метаболитни нарушения в организма и първична липоидоза на артериалната стена е наличието на експериментален модел на холестерола. Концепцията за първостепенното значение на локалните промени в артериалната стена, въпреки факта, че е изразена преди 100 години, все още няма убедителен експериментален модел.
" |
При експерименти върху зайци (n=16) е разработен модел на хиперлипидемия, предизвикана от интравенозно приложение на 10% емулсия на Lipofundin в доза 0,5 ml/kg за 30 дни. Експерименталният модел се характеризира с повишаване на нивото на триглицеридите и VLDL с 1,4 пъти, LDL с 1,2 пъти и намаляване на съдържанието на HDL с 1,4 пъти в кръвта на експерименталните животни. Едновременно с промените в липидния спектър на кръвта при опитни зайци се установява повишаване на нивото на лактат и С-реактивен протеин съответно 2,1 пъти и 13,4 пъти.
хиперлипидемия
експериментален модел
1. Калинкин М.Н., Волков В.С., Заварин В.В. Атеросклероза: патофизиология, лечение, първична профилактика. – Твер: RIC TGMA, 2009. – 215 с.: ил.
2. Косарев В.В., Бабанов С.А. Странични ефекти от лекарствената терапия: оценка и прогноза // Спешна медицина. – 2010. – No. 6 [Електронен ресурс]. URL: http://urgent.mif-ua.com/archive/issue-15105/article-15118/ (дата на достъп: 08.07.2011 г.).
3. Кухарчук В.В. Лечение на дислипидемия като важен фактор в превенцията на атеросклерозата и нейните усложнения // Системна хипертония. – 2007. – № 2. – С. 35–43.
4. Нечаева Г.И., Терещенко Ю.В. Предотвратяване на липидни нарушения // Лекуващ лекар. – 2010. – No. 2 [Електронен ресурс]. URL: http://www.lvrach.ru/2010/07/15081579/ (дата на достъп: 08.07.2011 г.).
Въведение
Сърдечно-съдовата патология (коронарна болест на сърцето, мозъчно-съдови нарушения, оклузивни заболявания на периферните артерии) изведе Русия на първо място сред индустриализираните страни в света по отношение на заболеваемостта, смъртността и инвалидността на работещото население. В Русия повече от 1 милион души умират годишно от сърдечно-съдови заболявания, половината от тях от исхемична болест на сърцето и други 40% от увреждане на мозъчните съдове. Според препоръките на GFOC от 2009 г. първичната и вторичната профилактика на сърдечно-съдовите заболявания се основават на мерки, насочени към коригиране на основните рискови фактори: ниска физическа активност, тютюнопушене, високо кръвно налягане, затлъстяване и липидни нарушения.
Нарушенията на липидния метаболизъм са един от най-важните рискови фактори за развитие на атеросклероза. Многобройни клинични и епидемиологични научни изследвания убедително показват, че не само хиперхолестеролемията, но и всяка хиперлипидемия може да допринесе за появата и по-нататъшното развитие на атеросклероза. В момента има няколко вида хиперлипидемия. Например, в съответствие с общоприетата систематизация, хиперлипидемията е разделена на 6 вида, включително идентифицирането на подтипове IIa и IIb. Различните видове хиперлипидемия имат различен атерогенен потенциал; най-голям атерогенен ефект има хиперлипидемията, характеризираща се с повишаване на нивото на общия и свободния холестерол.
Поради факта, че съвременните методи за лечение на лекарства трябва да бъдат разработени, като се вземе предвид естеството на дислипидемията, е необходимо да се създадат нови модели, които най-пълно съответстват на различни видове нарушения на липидите в кръвта.
При оценката на ефективността на нови средства за понижаване на липидите се използват различни експериментални модели на хиперлипидемия. Сред тях можем да различим холестерол, генетични, пероксидни модели на атеросклероза; модел A.N. Климова и др. (1966, 1969), въз основа на производството на атеросклеротични плаки върху аортата на зайци чрез парентерално приложение на хомоложен серум от животни с експериментална хиперхолестеролемия и др. Тези модели, наред с редица предимства, имат и значителни недостатъци, свързани с трудоемкостта и продължителността на възпроизвеждане на модела (холестеролният модел се възпроизвежда в рамките на 3-4 месеца). Недостатъкът на експерименталните модели, използващи малки лабораторни животни (плъхове, морски свинчета), е невъзможността да се събере достатъчно количество кръв за извършване на обширни биохимични изследвания за дълъг период от време, без да се навреди на опитните животни. В това отношение зайците са по-обещаващи за изучаване на хода на експерименталната атеросклероза. Липидните и липопротеиновите спектри на кръвта на експериментални животни от различни видове се различават, следователно, за по-обективна оценка на хиполипидемичния ефект на нови вещества, се препоръчва да се провеждат експерименти с животни от 2-3 вида.
Целта на това проучване е да се разработи модел на атерогенна хиперлипидемия при зайци.
Материали и методи
Опитите са проведени върху 16 безпородни зайци от двата пола с тегло 3,8±0,1 kg. Хиперлипидемията се индуцира чрез интравенозно приложение на 10% емулсия на Lipofundin (състав: соево масло - 50 g, средноверижни триглицериди - 50 g, фосфатиди от яйчен жълтък - 12 g, глицерол - 25 g, вода за инжекции - 1000 ml) при доза от 0,5 ml/kg дневно в продължение на 30 дни.
Развитието на хиперлипидемия се проследява чрез съдържанието на липопротеини в кръвната плазма на опитни животни. Биохимичните изследвания се провеждат седмично по време на експеримента, кръвта се взема от маргиналната вена на ухото в обем от 3-4 ml.
Липидният спектър на кръвния серум (общ холестерол, триглицериди, HDL) е изследван с помощта на реактиви, произведени от Biocon® (Германия). Концентрацията на LDL, VLDL и коефициентът на атерогенност се определят чрез изчислителния метод.
LDL холестерол
VLDL холестерол
Коефициентът на атерогенност се изчислява по формулата:
Нивото на лактат се определя по ензимен метод с помощта на реагенти, произведени от Biocon® (Германия).
Биохимичните изследвания (анализ на липидния спектър и нивата на лактат) са извършени на автоматичен биохимичен анализатор Flexor E (Vital Scientific, Холандия).
Концентрацията на С-реактивен протеин се определя чрез имуноензимен анализ с помощта на тест системи, произведени от Hema LLC (Русия) с аналитична чувствителност от 0,05 mg/l. Резултатите от ензимния имуноанализ бяха взети предвид с помощта на Zenyth 1100 микроплака мултидетектор (Anthos, Австрия).
За моделиране на хиперлипидемия при зайци, Lipofundin е избран въз основа на наличната информация, че мастните емулсии за парентерално хранене могат да причинят повишаване на нивата на липидите в кръвта.
Резултатите от изследването са обработени статистически с помощта на стандартния софтуерен пакет MS Excel 2007. Размерът на извадката за сравнителното изследване при 5% ниво на значимост беше изчислен с помощта на COMPARE 2 версия 2.57 WinPEPI 11.0.
Резултати и дискусия
В резултат на изследването е установено, че при интравенозно приложение на 10% емулсия на Lipofundin (0,5 ml / kg) в продължение на 30 дни, опитни зайци развиват тежка дислипопротеинемия, която се характеризира с повишаване на нивото на триглицеридите, LDL и VLDL и намаляване на съдържанието на HDL. Не са открити значителни промени в съдържанието на общия холестерол в кръвта на зайци, получаващи липофундин, през целия период на наблюдение (Таблица 1).
Таблица 1 - Промени в съдържанието на общ холестерол, триглицериди и липопротеини в кръвната плазма на зайци при интравенозно приложение на Lipofundin (0,5 ml / kg)
Изследвани показатели |
||||||
Общ холестерол |
||||||
Триглицериди |
||||||
Беше отбелязано, че нивото на триглицеридите в кръвта на зайци с въвеждането на Lipofundin постепенно се повишава и след 4 седмици наблюдение е средно 1,4 пъти (p<0,05) выше, чем у интактных животных. Содержание ЛПНП и ЛПОНП в крови подопытных животных возросло на 4-й неделе исследования соответственно в 1,2 (p<0,05) и 1,4 раза (p<0,05) по сравнению с исходным уровнем. Обращает на себя внимание тот факт, что уровень ЛПВП в крови подопытных кроликов снизился уже на 2-й неделе эксперимента и через 4 недели исследования был в среднем в 1,4 раза (p<0,05) ниже, чем у интактных животных.
Трябва да се отбележи, че тежката дислипопротеинемия, която се развива под въздействието на липофундин, е атерогенна по природа, както се вижда от увеличението на коефициента на атерогенност при експериментални животни с експериментална хиперлипидемия средно 1,8 пъти (p<0,05) по сравнению с интактными животными (таблица 2).
Таблица 2 - Промени в стойността на коефициента на атерогенност, съдържанието на лактат и С-реактивен протеин в кръвната плазма на зайци при интравенозно приложение на Lipofundin (0,5 ml / kg)
Проучваем индекс |
||||||
Лактат, U/l |
||||||
С-реактивен протеин, mg/l |
* - разликите с контролата (преди началото на приложението на Lipofundin) са значими.
Едновременно с промените в липидния спектър на кръвта при опитни зайци, получаващи Lipofundin, се открива увеличение на нивото на лактат и съответно С-реактивен протеин с 2,1 пъти (p<0,05) и в 13,4 раза (p<0,05) по сравнению с их содержанием у интактных животных. Возрастание уровня молочной кислоты в крови кроликов с экспериментальной гиперлипидемией, вероятно, свидетельствует о развитии тканевой гипоксии. С-реактивный белок, получивший свое название из-за способности вступать в реакцию преципитации с С-полисахаридом пневмококков, стимулирует иммунные реакции, в т. ч. фагоцитоз, участвует во взаимодействии Т- и В-лимфоцитов, активирует классическую систему комплемента, является высокочувствительным и быстрым индикатором повреждения тканей при воспалении, некрозе, травме. Увеличение его содержания при экспериментальной гиперлипидемии, возможно, является отражением повреждения сосудистой стенки у подопытных животных.
По този начин ние разработихме експериментален модел на атерогенна хиперлипидемия при зайци. Този модел на хиперлипидемия се характеризира с повишени нива на триглицериди, LDL и VLDL. Известно е, че хиперлипидемиите, принадлежащи към подтипове IIa, IIb и III, имат най-голям атерогенен ефект. В съответствие с фенотипната систематизация на хиперлипидемията (D. Fredrekson, 1967), разработеният модел съответства на тип IIb.
Този модел на хиперлипидемия при зайци е един от най-атерогенните модели, което също потвърждава повишаването на атерогенния коефициент.
Разработеният модел е удобен за търсене на ефективни антиатерогенни средства, тъй като се характеризира с простота, надеждност и бързина на изпълнение. Тежката хиперлипидемия се развива в рамките на 1 месец след началото на приложението на Lipofundin, докато други експериментални модели на хиперлипидемия при зайци, свързани с използването на холестеролно натоварване, изискват 3-4 месеца за моделиране.
заключения
- При интравенозно приложение на Lipofundin (0,5 ml/kg) в продължение на 30 дни, опитни зайци развиват изразени промени в липидния спектър на кръвта, които се характеризират с повишаване на нивото на триглицеридите и VLDL с 1,4 пъти (p<0,05), ЛПНП в 1,2 раза (p<0,05), снижением содержания ЛПВП в 1,4 раза (p<0,05). Коэффициент атерогенности увеличился в среднем в 1,8 раза (p<0,05).
- Разработеният модел на хиперлипидемия при зайци е силно атерогенен, според фенотипната систематизация на хиперлипидемията съответства на тип IIb.
Рецензенти:
- Митрохин Н.М., доктор на биологичните науки, професор, зам. Директор на OJSC "Всеруски научен център за безопасност на биологично активни вещества", Московска област, Стара Купавна.
- Слюсар Н. Н., доктор на медицинските науки, професор, директор на ИП „Лаборатория на проф. Н. Н. Слюсар“, Твер.
Работата е получена на 22.08.2011 г
Библиографска връзка
Демидова М.А., Волкова О.В., Егорова Е.Н., Савчук И.А. МОДЕЛИРАНЕ НА АТЕРОГЕННА ХИПЕРЛИПИДЕМИЯ ПРИ ЗАЕЦИ // Съвременни проблеми на науката и образованието. – 2011. – № 3.;URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=4689 (дата на достъп: 01.02.2020 г.). Предлагаме на вашето внимание списания, издадени от издателство "Академия за естествени науки"