Идентификация микроорганизмов по антигенной структуре. «Все могут короли…», или Многообразие бактериальных свойств
Микробиология: конспект лекций Ткаченко Ксения Викторовна
2. Антигены микроорганизмов
2. Антигены микроорганизмов
Инфекционные антигены – это антигены бактерий, вирусов, грибов, простейших.
Существуют следующие разновидности бактериальных антигенов:
1) группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или семейства);
2) видоспецифические (встречаются у различных представителей одного вида);
3) типоспецифические (определяют серологические варианты – серовары, антигеновары – внутри одного вида).
В зависимости от локализации в бактериальной клетке различают:
1) О – АГ – полисахарид; входит в состав клеточной стенки бактерий. Определяет антигенную специфичность липополисахарида клеточной стенки; по нему различают сероварианты бактерий одного вида. О – АГ слабо иммуногенен. Он термостабилен (выдерживает кипячение в течение 1–2 ч), химически устойчив (выдерживает обработку формалином и этанолом);
2) липид А – гетеродимер; содержит глюкозамин и жирные кислоты. Он обладает сильной адьювантной, неспецифической иммуностимулирующей активностью и токсичностью;
3) Н – АГ; входит в состав бактериальных жгутиков, основа его – белок флагеллин. Термолабилен;
4) К – АГ – гетерогенная группа поверхностных, капсульных антигенов бактерий. Они находятся в капсуле и связаны с поверхностным слоем липополисахарида клеточной стенки;
5) токсины, нуклеопротеины, рибосомы и ферменты бактерий.
Антигены вирусов:
1) суперкапсидные антигены – поверхностные оболочечные;
2) белковые и гликопротеидные антигены;
3) капсидные – оболочечные;
4) нуклеопротеидные (сердцевинные) антигены.
Все вирусные антигены Т-зависимые.
Протективные антигены – это совокупность антигенных детерминант (эпитопов), которые вызывают наиболее сильный иммунный ответ, что предохраняет организм от повторного инфицирования данным возбудителем.
Пути проникновения инфекционных антигенов в организм:
1) через поврежденную и иногда неповрежденную кожу;
2) через слизистые оболочки носа, рта, ЖКТ, мочеполовых путей.
Гетероантигены – общие для представителей разных видов антигенные комплексы или общие антигенные детерминанты на различающихся по другим свойствам комплексах. За счет гетероантигенов могут возникать перекрестные иммунологические реакции.
У микробов различных видов и у человека встречаются общие, сходные по строению антигены. Эти явления называются антигенной мимикрией.
Суперантигены – это особая группа антигенов, которые в очень малых дозах вызывают поликлональную активацию и пролиферацию большого числа Т-лимфоцитов. Суперантигенами являются бактериальные энтеротоксины, стафилококковые, холерные токсины, некоторые вирусы (ротавирусы).
Из книги Микробиология: конспект лекций автора Ткаченко Ксения Викторовна Из книги Микробиология автора Ткаченко Ксения ВикторовнаЛЕКЦИЯ № 4. Генетика микроорганизмов. Бактериофаги 1. Организация наследственного материала бактерий Наследственный аппарат бактерий представлен одной хромосомой, которая представляет собой молекулу ДНК, она спирализована и свернута в кольцо. Это кольцо в одной точке
Из книги Экология автора Митчелл ПолЛЕКЦИЯ № 11. Антигены 1. Свойства и типы антигенов Антигены – это высокомолекулярные соединения. При попадании в организм вызывают иммунную реакцию и взаимодействуют с продуктами этой реакции: антителами и активированными лимфоцитами.Классификация антигенов.1. По
Из книги Биология [Полный справочник для подготовки к ЕГЭ] автора Лернер Георгий Исаакович2. Систематика и номенклатура микроорганизмов Основной таксономической единицей систематики бактерий является вид.Вид – это эволюционно сложившаяся совокупность особей, имеющая единый генотип, который в стандартных условиях проявляется сходными морфологическими,
Из книги Путешествие в страну микробов автора Бетина ВладимирЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Людей впечатляют большие размеры. Наверное поэтому, вспоминая о юрском периоде, мы в первую очередь представляем себе гигантских динозавров, когда-то «правивших» нашей планетой. Однако, если какие-то организмы и «управляют» Землей, то это
Из книги Популярно о микробиологии автора Бухар Михаил Из книги На грани жизни автора Денков Веселин А.6. Жизнь и смерть микроорганизмов Жизнь есть творение К. Бернар Микробы в движении Левенгук, сообщая Лондонскому королевскому обществу о наблюдаемых им «зверушках», писал, что они отличаются способностью очень быстро передвигаться. Мы уже рассказывали, что, по
Из книги автораРост и размножение микроорганизмов Как сказал известный французский физиолог XIX века Клод Бернар, жизнь есть творение. Живые организмы отличаются от неживой природы главным образом тем, что растут и размножаются. Их рост и размножение лучше всего наблюдать у таких
Из книги автораПределы жизни микроорганизмов Жизнь и размножение микробов зависят от многих внешних факторов. К основным относится прежде всего температура окружающей среды. Самая низкая из известных нам температур, при которой прекращается тепловое движение молекул и атомов, - это
Из книги автораПредел выносливости микроорганизмов Итак, мы уже узнали, что микробы выносят значительные колебания температуры, гораздо большие, чем человек. Посмотрим же, как реагируют они на другие неблагоприятные условия.Давление воздуха на уровне моря и на 45° географической
Из книги автораДружба микроорганизмов Среди разнообразнейших представителей мира микробов развились и «дружеские», симбиотические отношения. Интересны, например, взаимоотношения между некоторыми простейшими и водорослями. В клетках инфузорий часто живут симбиотические зеленые или
Из книги автораГлава 12 Распространенность микроорганизмов Нас - тьмы, и тьмы, и тьмы. А. Блок Микроорганизмы - всюду. В воздухе, в воде, в почве - и везде их великое множество. Достаточно сказать, что только в одном кубическом сантиметре ризосферы (это часть почвы, непосредственно
Из книги автораАнабиоз и зимний покой в мире микроорганизмов и в мире растений В природе анабиоз не является патентом только животных организмов. Он широко представлен и среди микроорганизмов из царства Prokaryotae, к которым относятся все виды бактерий и синезеленых водорослей. Анабиоз
Биохимические свойства в основном типичны для рода Salmonella. Отличительными особенностями являются: отсутствие газообразования при ферментации S. Typhi, неспособность S. Paratyphi A продуцировать сероводород и декарбоксилировать лизин.
Эпидемиология. Брюшной тиф и паратифы являются антропонозами, т.е. вызывают заболевание только у человека. Источником инфекции являются больной или бактерионоситель, которые выделяют возбудитель во внешнюю среду с испражнениями, мочой, слюной. Возбудители этих инфекций, как и другие сальмонеллы, устойчивы во внешней среде, сохраняются в почве, воде. S. Typhi может переходить в некультивируемую форму. Благоприятной для их размножения средой являются пищевые продукты (молоко, сметана, творог, мясной фарш, студень). Передача возбудителя осуществляется водным путем, играющим в настоящее время существенную роль, а также алиментарным и контактно-бытовым путями. Заражающая доза равна приблизительно 1000 клеткам. Естественная восприимчивость людей к этим инфекциям высокая.
Патогенез и клиническая картина. Попав в тонкую кишку, возбудители тифа и паратифов инвазируют слизистую оболочку при
помощи эффекторных белков ТТСС-1, формируя первичный очаг инфекции в пейеровых бляшках. Следует отметить, что в под- слизистой оболочке осмотическое давление по сравнению с просветом кишечника ниже. Это способствует интенсивному синтезу Vi-антигена, который увеличивает антифагоцитарную активность возбудителя и подавляет выброс провоспалительных тканевых медиаторов клетками подслизистой оболочки. Следствием этого яв- ляются отсутствие развития воспалительной диареи на начальных этапах инфекции и интенсивное размножение микробов в макрофагах, приводящее к воспалению пейеровых бляшек и развитию лимфаденита, следствием чего являются нарушение барьерной функции мезентериальных лимфатических узлов и проникновение сальмонелл в кровь, в результате чего развивается бактериемия. Это совпадает с концом инкубационного периода, который длится 10-14 сут. Во время бактериемии, которая сопровождает весь лихорадочный период, возбудители тифа и паратифов с током крови разносятся по организму, оседая в ретикулоэндотели- альных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенки, легких, а также в костном мозгу, где они размножаются в макрофагах. Из купферовских клеток печени сальмонеллы по желчным протокам, в которые они диффундируют, попадают в желчный пузырь, где они также размножаются. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают его воспаление и с током желчи реинфицируют тонкую кишку. Повторное внедрение сальмонелл в пейеровы бляшки приводит к развитию в них гиперергического воспаления по типу феномена Артюса, их некрозу и изъязвлению, что может привести к кишечному кровотечению и прободению кишечной стенки. Способность возбудителей брюшного тифа и паратифов сохраняться и размножаться в фагоцитирующих клетках при функциональной недостаточности последних приводит к формированию бактерионосительства. Сальмонеллы также могут длительное время сохраняться в желчном пузыре, выделяясь с фекалиями в течение длительного времени, и контаминировать окружающую среду. К концу 2-й нед заболевания возбудитель начинает выделяться из организма с мочой, потом, материнским молоком. Диарея начинается в конце 2-й или начале 3-й нед заболевания, с этого время возбудители высеваются из фекалий.
Введение. Идентификация - определение (установление) видовой принадлежности микроба. В настоящее время общепринятый метод идентификации основан на изучении определенного набора наиболее важных фенотипических признаков исследуемого микроорганизма. Критерием для идентификации является наличие у микроба совокупности основных признаков, характерных для данного вида (таксонометрических признаков). Установление вида производится согласно международной таксономии бактерий (Bergey"s Manual of Systematic Bacteriology).
К основным видовым признакам бактерий относятся:
Морфология микробной клетки;
Тинкториальные свойства - особенности окрашивания с помощью простых и сложных методов окраски;
Культуральные признаки - особенности роста микроба на питательных средах;
в биохимические признаки - наличие у бактерий ферментов, необходимых для синтеза или расщепления (ферментации) различных химических соединений.
В бактериологической практике чаще всего изучают сахаро-литические и протеолитические ферменты.
К дополнительным признакам, используемым при идентификации, относятся:
Наличие видоспецифических антигенов (см. главу 10);
Чувствительность к видоспецифическим бактериофагам (см. главу 5);
Видовая резистентность к определенным антимикробным препаратам (см. главу 8);
Для патогенных бактерий - продукция определенных факторов вирулентности (см. главу 9).
Тонкая внутривидовая идентификация до биовара (серова-ра, фаговара, ферментовара и т.д.) - титрование - основана на выявлении соответствующего маркера: антигена (серотипи-рование, см. главу 10), чувствительности к типовому бактериофагу (фаготипирование, см. главу 5) и др.
В последние годы разработаны и начали применяться современные биохимические и молекулярно-биологические методы идентификации: хемоидентификация, анализ нуклеиновых кислот: рестрикционный анализ, гибридизация, полиме-разная цепная реакция (ПЦР), риботипирование и др.
▲ План занятия
▲ Программа
1. Идентификация бактерий.
2. Изучение биохимических свойств аэробных и анаэробных бактерий.
▲ Демонстрация
1. Незасеянный "пестрый ряд".
2. Варианты изменения "пестрого ряда".
3. "Пестрый ряд" для анаэробных бактерий.
4. Микрометод изучения биохимических свойств бактерий.
5. Рост бактерий, вырабатывающих пигменты.
▲ Задание студентам
1. Зарисовать варианты изменения "пестрого ряда".
2. Оценить результаты отсева чистой культуры: отметить наличие или отсутствие роста посеянной культуры, а также присутствие посторонних бактерий.
3. Убедиться в чистоте выделенной культуры, для этого приготовить мазок и окрасить его по методу Грама.
4. Поставить каталазную пробу на стекле и оценить ее результат.
5. Учесть результаты определения биохимической активности выделенных чистых культур.
6. С помощью таблицы-определителя на основании изученных морфологических, тинкториальных, культу-ральных и ферментативных свойств идентифицировать выделенные микробы.
Биохимическая идентификация. Для оценки биохимической активности бактерий используют следующие реакции:
1) ферментацию - неполное расщепление субстрата до
Промежуточных продуктов, например ферментацию углеводов с образованием органических кислот;
2) окисление - полное расщепление органического субстрата до С0 2 и Н2О;
3) ассимиляцию (утилизацию) - использование субстрата для роста в качестве источника углерода или азота;
4) диссимиляцию (деградацию) субстрата;
5) гидролиз субстрата.
Классический (традиционный) метод идентификации микробов по биохимическим признакам заключается в посеве чистой культуры на дифференциально-диагностические среды, содержащие определенные субстраты, с целью оценки способности микроорганизма ассимилировать данный субстрат или определения конечных продуктов его метаболизма. Исследование занимает не менее 1 сут. Примером является оценка саха-ролитической активности бактерий (способности ферментировать углеводы) с помощью посева на среды Гисса - короткий и длинный "пестрый ряд".
Идентификация бактерий по биохимическим признакам с помощью сред "пестрого ряда". Короткий "пестрый ряд" включает жидкие среды Гисса с моно- и дисахаридами: глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с 6-атомным спиртом - маннитом. В длинный "пестрый ряд" наряду с перечисленными углеводами вводят среды с разнообразными моносахаридами (арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза и др.) и спиртами (глицерин, дульцит, инозит и др.). Для оценки способности бактерий ферментировать углевод в среды добавляют индикатор (реактив Андреде или др.), позволяющий выявить образование кислых продуктов расщепления (органических кислот), и "поплавок" для обнаружения выделения
со 2 .
Чистую культуру исследуемого микроорганизма засевают петлей в среды "пестрого ряда". Посевы инкубируют при 37 "С в течение 18-24 ч или больше. В том случае, если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды; при разложении углевода до кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляется пузырек газа в поплавке. Если используют среды с полужидким агаром, то образование газа регистрируется по разрыву столбика. При отсутствии ферментации цвет среды не меняется. Поскольку бактерии ферментируют не все, а только определенные для каждого вида углеводы, входящие в состав сред Гисса, наблюдается довольно пестрая картина, поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором называют "пестрым рядом" (рис. 3.2.1; на вклейке).
Для определения протеолитических ферментов производят посев культуры бактерий уколом в столбик 10-20 % желатина,
пептонную воду. Посевы в желатине инкубируют при 20-22 °С в течение нескольких дней. При наличии протеолитических ферментов бактерии разжижают желатин, образуя фигуру, напоминающую воронку или елочку.
В посевах в пептонную воду*определяют продукты расщепления аминокислот после инкубирования в течение 2-3 сут при 37 °С путем постановки реакций на аммиак, индол, сероводород и др.
Реакция на аммиак. Узкую полоску лакмусовой бумаги укрепляют под пробкой так, чтобы она не соприкасалась с питательной средой. Посинение бумаги свидетельствует об образовании аммиака.
Реакция на индол. Способ Эрлиха: в пробирку с культурой бактерий прибавляют 2-3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор парадиметиламидобензальдегида с хлористоводородной кислотой). В присутствии индола наблюдается розовое окрашивание, при осторожном наслаивании образуется розовое кольцо (см. рис. 3.2.1).
Реакция на сероводород. В пробирку с пептонной водой помещают узкую полоску фильтровальной бумаги, смоченную сульфатом железа, и закрепляют ее под пробкой так, чтобы она не соприкасалась с питательной средой. При выделении сероводорода образуется нерастворимый сульфид железа (FeS), окрашивающий бумагу в черный цвет (см. рис. 3.2.1). Продукцию H 2 S можно определять также путем посева культуры бактерий уколом в столбик с питательной средой, содержащей реактивы для выявления H 2 S (смесь солей: сульфат железа, тиосульфат натрия, сульфит натрия). Положительный результат - среда приобретает черный цвет за счет образования FeS.
Обнаружение каталазы. На предметное стекло наносят каплю 1-3 % раствора пероксида водорода и вносят в нее петлю с бактериальной культурой. Каталаза разлагает пероксид водорода на кислород и воду. Выделение пузырьков газа свидетельствует о наличии у данного вида бактерий каталазы.
В бактериологической практике иногда ограничиваются изучением сахаролитических и протеолитических признаков исследуемых бактерий, если этого достаточно для их идентификации. При необходимости Исследуют другие признаки, например способность к восстановлению нитратов, карбоксили-рованию аминокислот, образованию оксидазы, плазмокоагула-зы, фибринолизина и других ферментов.
Результаты работ по идентификации выделенной культуры протоколируют (табл. 3.2.1).
Биохимические тесты 2-го поколения, основанные на применении концентрированных субстратов и более чувствительных методов обнаружения конечных продуктов реакции, по-
Каждый микроорганизм, как бы примитивно он ни был устроен, содержит несколько антигенов. Чем сложнее его структура, тем больше антигенов можно обнаружить в его составе. У различных микроорганизмов, принадлежащих к одним и тем же систематическим категориям, различают
группопецифические антигены - встречаются у разных видов одного и того же рода или семейства, видоспецифические - у различных представителей одного вида и типоспецифические (вариантные) антигены - у разных вариантов в пределах одного и того же вида. Последние подразделяют на серологические варианты, или серовары. Среди бактериальных антигенов различают Н, О, К и др. Антигены разных видов микроорганизмов по структуре составу резко отличаются друг от друга. Лучше всего изучен, антигенная мозаика бактерий, в составе которых различаю соматические О- и Vi-антигены, оболочечные, капсульные (К), жгутиковые (Н), протективные и рибосомальные. Как правило, все они являются сложными белковыми соединениями. Так, соматические О- и Vi-антигены содержатся в поверхностных структурах бактериальных клеток и тесно связаны с липополисахаридами. Оболочечные антигены образуются за счет О-антигенов, но в отличие от последних состоят из термолабильных и термостабильных фракций. Капсульные К-антигены представлены протеиновыми субстанциями (сибиреязвенная палочка) или сложными полисахаридами (стрептококк, клебсиеллы). Жгутиковые Н-антигены являются белками, рибосомальные и протективные - комплексными соединениями белков и нуклеиновых кислот. Антигенами являются также эндо- и экзотоксины бактерий.
Знание антигенной структуры бактерий дало возможность получить ряд диагностических и лечебных сывороток, применяемых соответственно для определения видовой принадлежности микробов и терапии инфекционных
болезней.
Жгутиковые Н- антигены . Эти антигены входят в состав бактериальных жгутиков. Н-антиген представляет собой белок флагеллин. Он разрушается при нагревании, а после обработки фенолом сохраняет свои антигенные свойства.
Соматический О- антиген . Ранее полагали, что О- антиген заключен в содержимом клетки, ее соме, поэтому и назвали его соматическим антиге-ном. Впоследствии оказалось, что этот антиген связан с бактериальной клеточной стенкой. О- антиген грамотрицательных бактерий связан с ЛПС клеточной стенки. Детерминантными группами этого сложного комплек-сного антигена являются концевые повторяющиеся звенья полисахаридных цепей, присоединенные к ее основной части. Состав сахаров в детерминан-тных группах, так же как и их число, у разных бактерий неодинаковы. Чаше всего в них содержатся гексозы (галактоза, глюкоза, рамноза и др.), амино-сахар (N-ацетилглюкозамин). О-антиген термостабилен : он сохраняется при кипячении в течение 1-2 ч, не разрушается после обработки формалином и этанолом. При иммунизации животных живыми культурами, имеющими жгутики, образуются антитела к О- и Н-антигенам, а при иммунизации кипяченой культурой образуются антитела только к О-антигену.
К-антигены (капсульные). Эти антигены хорошо изучены у эшерихий и сальмонелл. Они, так же как О- антигены, тесно связаны с ЛПС клеточной стенки и капсулой, но в отличие от О- антигена содержат главным образом кислые полисахариды: глюкуроновую, галактуроновую и другие уроновые кислоты. По чувствительности к температуре К-антигены подразделяют на А-, В- и L-антигены. Наиболее термостабильными являются А-антигены, выдерживающие кипячение более 2 ч, В -антигены выдерживают нагревание при температуре 60 °С в течение часа, а L-антигены разрушаются при нагревании до 60°С. К-антигены располагаются более поверхностно, чем О- антигены, и часто маскируют последние. Поэтому для выявления О- антигенов необходимо предварительно разрушить К-антигены, что достигается кипячением культур. К капсульным антигенам относится так называемый Vi - антиген. Он обнаружен у брюшнотифозных и некоторых других энтеробактерий, обладающих высокой вирулентностью, в связи с чем данный антиген получил название антигена вирулентности. Капсульные антигены полисахаридной природы выявлены у пневмококков, клебсиелл и других бактерий, образующих выраженную капсулу. В отличие от группоспецифических О- антигенов они часто характеризуют антигенные особенности определенных штаммов (вариантов) данного вида, которые на этом основании подразделяются на серовары. У сибиреязвенных бацилл капсульный антиген состоит из полипептидов.
Антигены бактериальных токсинов . Токсины бактерий обладают полно-ценными антигенными свойствами в том случае, если они являются растворимыми соединениями белковой природы. Ферменты, продуцируемые бактериями, в том числе факторы патогенности, обладают свойствами полноценных антигенов. Серьезного внимания заслуживают протективные антигены, обладающие малой токсичностью и обеспечивающие выработку многочисленных блокирующих антител. Хорошими антигенами являются анатоксины, полученные из экзотоксинов путем обезвреживания их формалином.
Протективные антигены . Впервые обнаружены в экссудате пораженной ткани при сибирской язве. Они обладают сильно выраженными антигенными свойствами, обеспечивающими иммунитет к соответствующему инфекци-онному агенту. Протективные антигены образуют и некоторые другие микро-организмы при попадании в организм хозяина, хотя эти антигены не являют-ся их постоянными компонентами.
Антигены вирусов . В каждом вирионе любого вируса содержатся различ-ные антигены. Одни из них являются вирусспецифическими. В состав других антигенов входят компоненты клетки хозяина (липиды, углеводы), которые включаются в его внешнюю оболочку. Антигены простых вирионов связаны с их нуклеокапсидами. По своему химическому составу они принадлежат к рибонуклеопротеидам или дезоксирибонуклеопротеидам, которые являются растворимыми соединениями и поэтому обозначаются как S-антнгены (solutio-раствор). У сложноорганизованных вирионов одни антигенные компоненты связаны с нуклеокапсидами, другие - с гликопротеидами внешней оболочки. Многие простые и сложные вирионы содержат особые поверхностные V-антигены - гемагглютиннн и фермент нейраминидазу. Антигенная специфичность гемагглютинина у разных вирусов неодинакова. Данный антиген выявляется в реакции гемагглютинации или ее разновид-ности - реакции гемадсорбции. Другая особенность гемагглютинина проявляется в антигенной функции вызывать образование антител - антигемагглютининов и вступать с ними в реакцию торможения гемагглютинации (РТГА).
Вирусные антигены могут быть группоспецифическими, если они обнаружи-ваются у разных видов одного и того же рода или семейства, и типоспеци-фическими, присущими отдельным штаммам одного и того же вида. Эти различия учитываются при идентификации вирусов. Наряду с перечисленными антигенами в составе вирусных частиц могут присутствовать антигены клетки хозяина. Так, например, вирус гриппа, выращенный на аллантоисной оболочке куриного эмбриона, реагирует с антисывороткой, полученной к аллантоисной жидкости. Этот же вирус, взятый из легких инфицированных мышей, реагирует с антисывороткой к легким данных животных и не реагирует с антисывороткой к аллантоисной жидкости.
Гетерогенные антигены (гетероантигены). Это общие или межвидовые (сходные по специфичности) антигены. Впервые их открыл Дж. Форссман. Иммунизируя кролика водной вытяжкой из почек морской свинки, он вызвал образование в его сыворотке групповых антител, реагировавших с эритроцитами барана. Далее выяснилось, что форссмановский антиген является липополисахаридом и встречается в органах лошадей, кошек, собак, черепах. Общие антигены обнаружены у эритроцитов человека и гноеродных кокков, энтеробактерий, вирусов оспы, гриппа и других микроорганизмов. Групповая общность антигенной структуры у различных видов клеток получила название антигенной мимикрии . В случаях антигенной мимикрии иммунная система человека утрачивает способность быстро распознавать чужеродную метку и вырабатывать иммунитет, в результате чего патогенные микробы некоторое время могут беспрепятственно размножаться в организме. Антигенной мимикрией пытаются обосновать длительное выживание патогенных микробов в организме больного, или персистенцию, резидентное (устойчивое) микробоносительство и даже поствакцинальные осложнения.Общие антигены, обнаруженные у представителей различных видов микроорганизмов, животных и растений, называют гетерогенными. Например, гетерогенный антиген Форсмана содержится в белковых структурах органов морской свинки, в эритроцитах барана и сальмонеллах.
По специфичности антигены бактерий подразделяют на гомологичные - видо- и типоспецифические и гетерогенные - групповые, межвидовые.
Видовые и особенно типовые антигены отличаются высокой специфичностью. В ответ на их введение в организме животных вырабатываются только такие антитела, которые реагируют с антигенами определенного вида или разновидности микроба.
Идентификация микробов – это определение систематического положения выделенной из какого-либо источника культуры до уровня вида или варианта. В случае уверенности в чистоте выделенной в процессе культурального метода культуры приступают к ее идентификации, опираясь при этом на ключи (то есть известный перечень ферментативной активности, известную антигенную структуру), классификацию и характеристику типовых штаммов, описанных в руководствах.
В целях идентификации используют комплекс признаков: морфологических (форма, размеры, структура, наличие жгутиков, капсулы, спор, взаимное расположение в мазке), тинкториальных (окраска по Граму и иными методами), химических (Г+Ц в ДНК и содержание, напр., пептидогликана, целлюлозы, хитина и др.), культуральных (питательные потребности, условия, темпы и характер роста на разных средах), биохимических (ферментативная деградация и трансформация различных веществ с образованием промежуточных и конечных продуктов), серологических (антигенная структура, специфичность, связи), экологических (вирулентность, токсигенность, токсичность, аллергенность микробов и их продуктов, круг восприимчивых животных и др. биосистем, тропизм, межвидовые и внутривидовые взаимоотношения, влияние факторов внешней среды, включая фаги, бактериоцины, антибиотики, антисептики, дезинфектанты).
При идентификации микроорганизмов нет необходимости изучать все свойства. Более того, с экономической точки зрения важно, чтобы круг испытанных тестов был не большим, чем это необходимо ; желательно также использовать простые (но надежные) тесты, доступные широкому кругу лабораторий.
Идентификацию микроорганизмов начинают с отнесения культуры к крупным таксонам (тип, класс, порядок, сем.). Для этого часто достаточно определить источник получения культуры, морфологические и культуральные свойства, окраски по Граму или Романовскому-Гимзе. Для установления рода, вида и особенно варианта приходится применять определение биохимических, серологических, экологических признаков. Схемы идентификации микробов существенно различаются. Так, в идентификации бактерии акцент делают на биохимические и серологические свойства, грибов и простейших - на морфологические особенности клеток и колоний. При идентификации вирусов используют метод молекулярной гибридизации для установления специфичности генома, а также специальные серологические реакции.
Биохимическая идентификация чистой культуры бактерий проводится с помощью дифференциально-диагностических сред. Дифференциально-диагностические среды содержат субстрат для какого-либо фермента, выявляемого у микроба, и индикатор, фиксирующий изменение рН питательной среды и окрашивающий ее в цвета, характерные для кислых или щелочных значений рН (рис.2.1).
Рис.2.1. Пример биохимической (ферментативной) активности представителей семейства энтеробактерий. В среды добавлен индикатор - бромфеноловый синий, при нейтральных значениях рН среда имеет травянисто-зеленый цвет, при кислых значениях - жёлтый, при щелочных значениях рН - синий. Индол - щелочной продукт, наличие уреазы сопровождается образованием мочевины (щелочные значения рН), ферментация углеводов сопровождается образованием кислоты. Положительная проба на сероводород сопровождается почернением среды вследствие действия специального реактива
Серологическая идентификация подразумевает определение антигенной специфичности исследуемой культуры микробов и антигенной формулы - символического отображение антигенной структуры бактерий. Например, антигенную структуру S. typhi обозначают как O9,12:Vi:Hd; одного из сероваров E. coli - как O111:K58:H2. Антигенную формулу определяют в реакции агглютинации на стекле с помощью набора монорецепторных антисывороток, т.е. антител к определенным антигенам бактерий. В качестве исследуемых антигенов используют выращенную культуру бактерий, каждый микроб представляет собой корпускулярный антиген, дающий феномен агглютинации при добавлении специфичных ему антител. Некоторые проблемы возникают при исследовании капсульных бактерий: капсула экранирует соматический антиген, поэтому для исследования его бактериальную культуру прогревают. Высокая температура способствует разрушению термолабильной капсулы и О-антиген становится доступным для типирования. Техника постановки реакции агглютинации на стекле . На чистое обезжиренное стекло наносят каплю физ.раствора (контроль) и каплю антисыворотки. Если антисывороток несколько, то берут несколько стекол. В каждую каплю вносят с помощью бактериальной петли культуру микробов. В течение 1-3 мин наблюдают за появление агглютинатов, которые образуются при специфическом связывании определенных антител с бактериальными антигенами и их последующим объединением в крупные видимые глазом хлопья.